夏润林, 潘厚军, 赵飞, 方翔, 石存斌, 李华, 吴淑勤
热激蛋白(HSP)是生物适应环境温度变化的重要媒介分子,本试验中克隆了多子小瓜虫IchthyophthiriusmultifiliisHSP70(Im HSP70)基因的ORF,采用荧光定量RT-PCR法,在水温为20、25、30 ℃的条件下检测了HSP70基因在多子小瓜虫幼虫、滋养体和包囊3个不同发育阶段的表达情况。结果表明:Im HSP70基因的ORF为1995 bp,预测编码为664 aa;Im HSP70蛋白的二级结构主要以α-螺旋和无规卷曲为主,空间构型包括N端ATPase功能域和C端多肽结合功能域;与其他物种HSP70蛋白序列进行同源性比较发现,Im HSP70与螅状独缩虫CarchesiumpolypinumHSP70的同源性最高,为78.08%;Im HSP70与分类地位同为纤毛门的螅状独缩虫、嗜热四膜虫Tetrahymenathermophila、变藓棘毛虫Sterkiellahistriomuscorum的HSP70聚在一个分支;3种温度下幼虫的HSP70表达量均最低,20 ℃和25 ℃时,HSP70基因在滋养体中的表达量显著高于幼虫和包囊(P<0.05),而30 ℃时,HSP70基因在包囊中的表达量显著高于滋养体和幼虫(P<0.05);30 ℃时HSP70基因在包囊中的表达量显著高于25 ℃(P<0.05)。研究表明,试验所用多子小瓜虫的HSP70基因在30 ℃时仍大量表达,且能感染试验鱼,推测该虫株为热带型多子小瓜虫, HSP70基因在多子小瓜虫对抗外界高温环境中可能发挥着重要的作用。