田野, 李元鑫, 全紫娇, 刘可欣, 续浩渊, 刘佳琪, 范翼辰, 韩冰, 韩泠姝, 丁君
为了探究细胞凋亡相关基因Caspase-8在中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)免疫反应中的作用及表达特征,采用RACE技术,以及实时荧光定量PCR、RNA干扰等方法,对中间球海胆Caspase-8基因及其编码氨基酸的分子特征、不同发育阶段及不同组织中的表达和生物学功能进行了研究。结果表明:Caspase-8全长cDNA包含3 107个碱基对(bp),推测的开放阅读框为2 064 bp,可编码687个氨基酸(AA)。该蛋白的预测分子量为254 700,理论等电点(pI)为4.85;Caspase-8蛋白具有保守的结构特征,包括两个死亡效应结构域(DED)和半胱氨酸天冬氨酸特异性催化结构域(CASc);不同组织表达结果显示,Caspase-8在体腔细胞中表达最高,在肠道中表达最低;不同发育阶段表达结果显示,Caspase-8在8细胞期表达量最高,在原肠胚期表达量最低;通过特异性小干扰RNA(siRNA)敲低Caspase-8基因,分别检测Caspase-8和Caspase-3的表达量,并在干扰前后分别检测关键酶活性;Caspase-8在体腔细胞干扰率最高,Caspase-3在肠道和体腔细胞中的表达水平显著下调(P<0.05),表明Caspase-3与Caspase-8存在调控关系;SOD、CAT、POD和GSH-Px的活性显著降低(P<0.05),表明Caspase-8敲低可能抑制海胆的免疫反应。研究表明,Caspase-8在中间球海胆免疫反应中发挥重要作用,Caspase-8与Caspase-3之间存在调控关系。