摘要：研究了不同温度(18、22、26、30、34 ℃)和不同盐度(10、15、20、25、30、35)对薄片镜蛤Dosinialaminata受精卵孵化率及幼虫生长与存活的影响。结果表明：薄片镜蛤适宜孵化温度为26～34 ℃，受精后第9天时，26 ℃组幼虫成活率最高，为77.67%±1.52%，且幼虫生长最快，第9天时平均壳长和壳高分别为145.50、122.83 μm；薄片镜蛤的适宜孵化盐度为20～30，受精后第9天时，25盐度组幼虫成活率最高，为73.33%±2.89%，第7天至第9天时，25盐度组幼虫生长最快，第9天时平均壳长和壳高分别为144.67、122.83 μm。研究表明，薄片镜蛤幼虫生长的适宜温度为22～30 ℃，最适生长温度为26 ℃，幼虫生长的适宜盐度为20～30。
关键词：薄片镜蛤；孵化；生长；存活；温度；盐度
薄片镜蛤Dosinialaminata隶属于软体动物门Mollusca、瓣鳃纲Lamellibranchia、帘蛤目Veneroida、帘蛤科Veneridae、镜蛤属Dosinia，俗称蛤叉，主要生活在潮间带中、低潮区的泥沙底质中。在中国北起辽宁，南至海南琼山北港，在国外从日本陆奥湾到九州、朝鲜半岛、菲律宾、印度尼西亚均有分布[1]。薄片镜蛤壳质薄而脆，外套窦深，先端略圆，水平伸向贝壳中央，水管在伸展时可达壳长的4～5倍[2]。薄片镜蛤是一种经济价值较高的海产贝类，具有出肉率高、营养丰富、肉味鲜美等优点，深受消费者喜爱。近年来，由于过度捕捞和环境条件的恶化，自然海区的产量正在逐年减少。为了保护海洋生物的多样性，维持海洋资源的可持续发展，开展薄片镜蛤的人工繁育研究具有重要意义。闫喜武等[2]对大连庄河地区薄片镜蛤的繁殖生物学进行了初步研究，比较了不同附着基对薄片镜蛤幼虫的采苗效果，发现以海泥为附着基采苗效果较好。薄片镜蛤的人工育苗试验曾有开展[2-3]。关于温度和盐度对海洋贝类受精卵孵化及幼虫生长与存活的影响，国内外已有不少报道[4-10]。然而环境因子对薄片镜蛤受精卵孵化及幼虫生长与存活的影响目前尚未见报道。本研究中，研究了不同温度和盐度对薄片镜蛤受精卵孵化及浮游幼虫生长与存活的影响，以期为薄片镜蛤苗种的规模培育提供基础资料。
1.1材料
试验用2～3龄薄片镜蛤亲贝于2013年7月采自大连市庄河近海，壳长为(45.81±3.43)mm，壳高为(44.62±3.64)mm，壳宽为(18.94±1.22)mm。
1.2方法
1.2.1 受精卵的孵化 将采集的亲贝吊养于庄河市海洋村贝类育苗场生态虾池中促熟。定期取样观察亲贝性腺的发育状况，待性腺发育成熟时，将亲贝洗刷干净，阴干12～15 h后放入50 L聚乙烯桶中待其排放精卵。精卵排放完毕后用筛绢网洗去脏污，取部分受精卵作为孵化期的试验材料，24 h后发育至D形幼虫，统计各组受精卵的孵化率；其余受精卵继续培养，培育用水为二级沙滤海水并过300目筛绢，水温为25.2～26.5 ℃，盐度为25～26，孵化密度为30个/mL;24 h后发育至D形幼虫时，用于温度和盐度试验。
1.2.2 温度试验 试验设置18、22、26、30、34 ℃ 5个温度，盐度为26。试验在2 L塑料桶中进行，各温度组采用加热管及人工冰袋进行控温，温度精度控制在±0.5 ℃。孵化密度为30个/mL，浮游幼虫培育密度为10个/mL。每2天全量换等温海水一次。每天投饵两次，用金藻和小球藻(体积比为1∶1)混合投喂，日投饵量为4～6万个/mL。各温度组均设3个重复, 每2天取样1 次，测定并计算各组幼虫的生长和存活率。
1.2.3 盐度试验 试验设置10、15、20、25、30、35 6个盐度，温度为25～26 ℃。试验在2 L的塑料桶中进行，通过向海水中加淡水和添加人工海水晶控制各组的盐度，用手持盐度折射仪(日本ATAGO公司)校对。孵化密度为30个/mL，浮游幼虫培育密度为10个/mL。换水和投饵方案同上。各试验组均设3个重复，每2天取样1次，测定并计算各组幼虫的生长和存活率。
1.3数据处理
幼虫的壳长、壳高在目微镜下测量，测量时每次随机抽取30个个体。用Excel软件对试验结束时(第9天)的数据进行处理，用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析(One-Way ANOVA)和Duncan多重比较，显著性水平设为0.05。
孵化率和幼虫存活率的计算公式为
孵化率=D形幼虫数/受精卵数×100%，
幼虫存活率 = 浮游幼虫数/试验开始时幼虫总数×100%。
2.1温度对孵化率的影响
如图1所示，在18～34 ℃温度范围内，薄片镜蛤受精卵的孵化率随着温度的升高先升高后降低，26 ℃组的孵化率最高(91.00%±3.60%)，略高于34 ℃(86.00%±2.64%)和30 ℃(87.67%±7.50%)组(P>0.05)，显著高于18 ℃(33.67%±4.04%)和22 ℃(57.67%±5.50%)组(P<0.05)。18 ℃时发育缓慢，24 h后大部分个体仍处于担轮幼虫期，且畸形率较高。
2.2温度对幼虫生长和存活的影响
如图2所示，温度对薄片镜蛤浮游幼虫壳长、壳高生长的影响趋势基本相同。发育至第9天时，22、26、30 ℃条件下幼虫的生长较快，壳长×壳高分别为(141.67±1.04)μm×(120.50±1.73)μm、(145.50±1.00)μm×(122.83±0.76)μm、(142.00±2.29)μm×(119.17±2.50)μm，均显著大于18 ℃和34 ℃时的壳长×壳高[(129.50±3.12)μm×(106.67±2.84)μm、(131.50±1.73)μm×(108.50±3.91)μm](P<0.05)；26 ℃时幼虫的壳长和壳高均为各组中最大，且壳长日增长速度也最大，为4.10 μm/d。
注：标有不同小写字母者表示组间有显著性差异(P<0.05)，标有相同小写字母者表示组间无显著性差异(P>0.05)，下同
Note:The means with different letters are significant differences at the 0.05 probability level, and the means with the same letters are not significant differences, et sequentia
图1 温度对孵化率的影响
Fig.1 The hatching rates at different temperature
图2 温度对幼虫生长的影响
Fig.2 The growth of the larvae at different temperature
如图3所示，温度对浮游幼虫的存活影响较大。34 ℃组在3日龄时已出现幼虫活力下降、下沉等现象，存活率大幅度降低；发育至第9天时，幼虫成活率仅为46.33%±2.08%，显著低于其他各组(P<0.05)。发育至第9天时，18～30 ℃各组均有较高的存活率，其中18 ℃组存活率最低，但也达到68.00%±2.00%，26 ℃组存活率最高(77.67%±1.52%)，且显著高于22 ℃(72.67%±2.51%)和30 ℃组(70.33%±1.52%)(P<0.05)。
图3 温度对幼虫存活率的影响
Fig.3 The survival rate of the larvae at different temperature
2.3盐度对孵化率的影响
如图4所示，盐度对薄片镜蛤的孵化率有较大影响。受精24 h后，20、25、30盐度组孵化率均较高，分别为82.00%±5.29%、83.50%±3.12%、74.67%±6.00%，显著高于10、15、35盐度组(P<0.05)。10、35盐度组孵化率较低，分别为25.33%±4.16%、20.33%±6.80%，绝大部分胚胎能发育至担轮幼虫期前后，但畸形率较高。
图4 盐度对孵化率的影响
Fig.4 The hatching rates at different salinities
2.4盐度对幼虫生长和存活的影响
如图5所示，盐度对浮游幼虫的生长有显著性影响，低盐、高盐都会抑制幼虫的生长和发育。发育至第9天时，10和35盐度组的壳长、壳高均较小，壳长×壳高分别为(120.83±2.75)μm×(94.0±2.29)μm、(131.50±1.00)μm×(106.33±2.02)μm，均显著低于15、20、25、30盐度组[(138.33±2.02)μm×(116.50±4.27)μm、(142.5±2.65)μm×(120.83±0.57)μm、(144.67±2.47)μm×(122.83±1.76)um、(131.5±1.00)μm×(106.33±2.02)μm](P<0.05)。而15、20、25和30盐度组中，15盐度组的壳长和壳高均较小，且与其他盐度组有显著性差异(P<0.05)；20、25、30试验组壳长的日增长速度分别为3.93、4.02、3.87 μm/d。
图5 盐度对幼虫生长的影响
Fig.5 The growth of the larvae at different salinities
如图6所示，当盐度为35时，发育至第5天时幼虫成活率开始大幅度下降，发育至第9天时幼虫成活率仅为41.00%±2.65%，显著低于其他各组(P<0.05)。发育至第9天时，10和15低盐度组的存活率分别为52.67%±2.08%和55.67%±2.08%，均与20、25、30盐度组有显著性差异(P<0.05)，而25盐度组的存活率最高，为73.33%±2.89%。
图6 盐度对浮游幼虫存活率的影响
Fig.6 The survival rate of the larvae at different salinities
温度和盐度是影响水产动物生理和行为的重要环境因子，在海洋生态系统中，这两个环境因子决定了生物的分布和生存[11]。温度和盐度对海洋贝类的孵化及幼虫的生长与存活有重要影响，贝类的生活习性与地理分布也直接影响对温度和盐度的耐受力。随着贝类的发育，对环境因子的耐受力也有所变化，浮游幼虫期对环境因子比较敏感，因此，掌握浮游幼虫生存适宜的温度和盐度十分必要，可为贝类的人工育苗提供参考。
3.1温度对孵化率及幼虫生长与存活的影响
温度是影响变温动物生理代谢的一个重要因子，贝类属于变温动物，因而温度是影响贝类生理的主要因素。研究表明，温度对贝类的孵化及幼虫存活和生长发育均有明显影响[12-15]，低温和高温均会影响幼虫的生长和发育。本试验结果表明，薄片镜蛤的适宜孵化温度为26～34 ℃，孵化的适温范围略高于毛蚶[12]和青蛤[13]，远高于栉孔扇贝[16]，说明薄片镜蛤胚胎对高温的适应性较强，这与薄片镜蛤夏季繁殖的习性相一致。
贝类幼虫生长速度与温度关系密切，幼虫的生长速度一般表现为在达到最适温度前，随温度的升高而增加，超过最适温度后，随着温度的继续升高会下降[14]。本试验中，18 ℃温度下浮游幼虫虽然有较高的成活率，但是幼虫生长缓慢，所以不适宜幼虫生长。浮游幼虫的适宜生长温度为22～30 ℃，最适生长温度为26 ℃。适宜温度范围与缢蛏[7]相近，但高于栉孔扇贝[16]，这可能与薄片镜蛤同样营埋栖生活的生活习性有关。值得注意的是，在苗种生产过程中，幼虫培育水温的升高可以促进幼虫的生长，但当水温升高到一定程度时，也会显著降低幼虫的存活率。原因可能是较高的水温加速了水中致病原生动物以及细菌的滋生，增加了幼虫的耗氧，同时可能导致幼虫摄食量下降[17]。
3.2盐度对孵化率及幼虫生长与存活的影响
盐度对贝类孵化率的影响已有较多报道，国内外学者研究了海湾扇贝[6]、青蛤[13]、栉孔扇贝[16]和文蛤[18]等不同盐度下的孵化率，结果表明，盐度对孵化率会产生明显影响。本试验中，薄片镜蛤的适宜孵化盐度为20～30，孵化率均可达到70%以上。这比李琼珍等[19]研究的大獭蛤胚胎发育适宜盐度范围为26.6～31.9要宽，与沈伟良等[12]研究的毛蚶的胚胎发育适宜盐度范围为18～30相近。
近年来，盐度对贝类幼虫生长和发育的影响研究已广泛开展[20-26]。许多研究发现，不同的海洋无脊椎动物对盐度的适应能力不同[27]。本试验中，15盐度组幼虫的生长和存活均受到了抑制，与20、25、30盐度组有显著性差异(P<0.05)，可能是因为海水渗透压的改变超出了其自身的调节能力，导致幼虫死亡。海洋无脊椎动物幼体在过高或过低盐度中生存，出现生长缓慢、发育延迟的主要原因，可能在于机体在极端盐度中的能量利用效率降低[28]。本试验中，薄片镜蛤幼虫生长的适宜盐度为20～30，与青蛤幼虫生长的适宜盐度范围相比要窄[13]，较缢蛏的适盐范围(4.5～28.3)、最适盐度(12.4)要高[7]。这可能与薄片镜蛤的生活习性和地理分布有关。
Berger等[29]研究发现，不适宜的盐度会降低海洋贝类幼虫对不良环境的抵抗能力和对食物的消化吸收效率，严重影响其机体的生长和存活。本研究表明，盐度过高或过低都会造成薄片镜蛤幼虫生长缓慢、成活率降低。尽管部分幼虫在盐度为10和35下能够存活，但是存活个体中畸形数量较多。通过观察发现，低盐和高盐组部分幼虫活动能力减弱，摄食能力下降，胃不饱满，对外界刺激反应迟钝，最终死亡。这是由于幼虫体内积累了一定的营养物质，在不利环境中，幼虫仍然可依靠自身积累的营养物质以及卵中带来的营养物质继续生长，但当体内的营养物质耗尽后生长则停止[6]。
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Abstract：The effects of temperature (18,22,26,30 and 34 ℃) and salinity (10,15,20,25,30 and 35)on hatching rate, growth and survival were investigated in clamDosinialaminatalarvae. The results showed that the suitable incubation temperature was found to be changed from 26 ℃ to 34 ℃,the maximal larval survival rates (77.67%±1.52%) at water temperature of 26 ℃ on day 9 post-hatching. From day 3 to day 9 post-hatching, the maximal growth rate was observed at 26 ℃,with shell length of 145.50 μm and shell height of 122.83 μm on day 9.For salinity, the maximal survival rate (73.33%±2.89%) was observed at a salinity of 25 on day 9.The best growth was found in the larvae at a salinity of 25, with shell length of 144.67 μm and shell height of 122.83 μm from day 7 to day 9. The findings indicate that the suitable temperature for larvae of the clam was about 22-30 ℃, with the optimal temperature of 26 ℃，and the suitable salinity was about 20-30 for the larvae.
Key words：Dosinialaminata; hatching; growth; survival; temperature; salinity
DOI：10.3969/J.ISSN.2095-1388.2014.04.008
文章编号：2095-1388(2014)04-0364-05
收稿日期：2013-12-05
基金项目：大连市科学技术基金资助项目(2013J21DW010);现代农业产业技术体系建设专项(CARS-48)
中图分类号：S968.3
文献标志码：：A