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大连海洋大学学报  2014, Vol. 29 Issue (4): 329-335    DOI: 10.3969/J.ISSN.2095-1388.2014.04.002
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虾夷马粪海胆TLR基因cDNA克隆及表达分析
王轶南,于卓,刘洋,刘学伟,王姣姣,常亚青
大连海洋大学 农业部北方海水增养殖重点实验室,辽宁 大连 116023
CloningandexpressionanalysisofTLRcDNAfromseaurchinStrongylocentrotusintermedius
WANG Yi-nan, YU Zhuo, LIU Yang, LIU Xue-wei, WANG Jiao-jiao, CHANG Ya-qing
Key Laboratory of Mariculture & Stock Enhancement in North China’s Sea, Ministry of Agriculture, Dalian Ocean University, Dalian 116023, China
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摘要 采用同源克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得一条虾夷马粪海胆StrongylocentrotusintermediusTLR基因的全长cDNA序列SiTLR-1(GenBank:HQ259110),并采用实时定量PCR技术分析了其在组织中的分布以及在致病弧菌Vibriofortis、β-D葡聚糖和dsRNA刺激后的表达情况。结果表明:SiTLR-1全长序列为3637 bp,形成16个α螺旋、33个β折叠;SiTLR-1蛋白有两个跨膜区段,在725~750位有跨膜区,发现1个信号肽(1~32aa)、1个亮氨酸重复富集区(LRR);SiTLR-1在检测的各组织中均有表达,在体腔液中表达量显著高于围口膜、管足和齿间肌(P<0.05);经V.fortis、β-D-葡聚糖刺激后,体腔液中的SiTLR-1表达量显著上升,刺激后12 h达到最高值;经dsRNA刺激后,体腔液中的SiTLR-1表达变化较小,仅在3 h时略有升高。研究表明,TLR基因参与虾夷马粪海胆的免疫应答,克隆获得的SiTLR-1可特异性识别细菌和β-D-葡聚糖。
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王轶南
于卓
刘洋
刘学伟
王姣姣
常亚青
关键词:  虾夷马粪海胆  TLR  RACE  定量PCR    
Abstract: One complete cDNA of TLR named SiTLR-1(GenBank:HQ259110) was cloned from sea urchinStrongylocentrotusintermediusthrough degenerate primer PCR amplification and SmartTMRACE technology. Expression distribution in different tissue after challenge withVibriofortis,β-D glucosan,and dsRNA were assessed using quantitative real-time PCR (qRT-PCR).The full-length cDNA sequence of SiTLR-1 is 3637 bp,with 16 α-helix,33 β-sheet;composed of 1 transmembrane domain (725-750aa),a putative signal peptide (1-32aa), and a leucine-rich repeat (LRR).SiTLR-1 was assessed in all tested tissues (peristomial membrane,gut,coelomic fluid, muscle in Aristotles lantern,tube feet),the expression level in coelomic fluid was significantly higher than the others(P<0.05); the expression level of SiTLR-1 in coelomic fluid was strongly up-regulated after challenge withV.fortisand β-D glucosan,reach the highest point at 12 h; the expression level of SiTLR-1 showed no significant difference after challenge with dsRNA, just weakly up-regulated at 3 h. The findings showed that, TLR genes participated in the immune response of sea urchinS.intermedius, SiTLR-1 can specifically identify bacteria and β-D glucosan.
Key words:  trongylocentrotusintermedius    TLR    RACE    qRT-PCR
                    发布日期:  2016-12-30      期的出版日期:  2014-08-21
中图分类号:  S917  
引用本文:    
王轶南, 于卓, 刘洋, 刘学伟, 王姣姣, 常亚青. 虾夷马粪海胆TLR基因cDNA克隆及表达分析[J]. 大连海洋大学学报, 2014, 29(4): 329-335.
WANG Yi-nan, YU Zhuo, LIU Yang, LIU Xue-wei, WANG Jiao-jiao, CHANG Ya-qing. CloningandexpressionanalysisofTLRcDNAfromseaurchinStrongylocentrotusintermedius. Journal of Dalian Ocean University, 2014, 29(4): 329-335.
链接本文:  
https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/10.3969/J.ISSN.2095-1388.2014.04.002  或          https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/Y2014/V29/I4/329
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