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大连海洋大学学报  2016, Vol. 31 Issue (2): 140-146    DOI: 10.16535/j.cnki.dlhyxb.2016.02.004
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红鳍东方鲀gsdf基因的克隆及表达模式分析
闫红伟1,田雨顺1,姜丽楠1,王连顺1,刘 洋1,刘 奇2,刘圣聪3
1.大连海洋大学水产与生命学院,辽宁大连116023;2.大连海洋大学辽宁省海洋牧场工程技术研究中心,辽宁大连116023;3.大连天正实业有限公司,辽宁大连116000
Cloning and expression profiling of the gsdf gene in red fin puffer Takifugu rubripes
YAN Hong-wei1,TIAN Yu-shun1,JIANG Li-nan1,WANG Lian-shun1,LIU Yang1,LIU Qi2,LIU Sheng-cong3
1.College of Fisheries and Life Science,Dalian Ocean University,Dalian 116023,China;2.Center for Marine Ranching Engineering Science Research of Liaoning,Dalian Ocean University,Dalian 116023,China;3.Dalian Tianzheng Co.Ltd.Dalian 116000,China
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摘要 为研究红鳍东方鲀Takifugu rubripes的性别决定因子 (gonadal soma derived factor,GSDF),利用cDNA末端快速扩增技术 (RACE)首次克隆了红鳍东方鲀gsdf基因 (Trgsdf)的cDNA全长序列 (GenBank登陆号:KR914667)。结果表明:Trgsdf cDNA序列全长为1734 bp,其中5′端非编码区144 bp,开放阅读框648 bp,3′端非编码区942 bp,共编码215个氨基酸;预测的氨基酸序列中存在1个长度为19个氨基酸的信号肽和相同长度的跨膜区,1个N-糖基化位点NST,1个TGF-β家族成员特有的保守结构域;BLAST同源性分析结果显示,红鳍东方鲀GSDF氨基酸序列与其他鱼类的相似性为26%~58%;系统发育分析结果显示,鱼类GSDF单独聚为一支,与TGF-β超家族内的其他成员分开,红鳍东方鲀与青鳉Oryzias latipes GSDF的亲缘关系最近,先聚为一支,后与三斑海猪鱼Halichoeres trimaculatus聚在一起,与矛尾鱼Latimeria menadoensis的GSDF亲缘关系最远;应用RT-PCR技术检测Trgsdf mRNA在雌性和雄性红鳍东方鲀成鱼不同组织中的表达,结果显示,Trgsdf mRNA在卵巢和精巢中高表达,在皮肤和肌肉组织中微量表达,在其他组织中无表达;采用相对实时荧光定量PCR方法比较了成鱼卵巢和精巢中Trgsdf mRNA的表达量,结果显示,Trgsdf mRNA在精巢中的表达量显著高于卵巢 (P<0.05),约为卵巢表达量的6倍。研究表明,gsdf基因可能在红鳍东方鲀的性腺尤其是精巢的分化和发育过程中起着重要的作用。
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闫红伟
田雨顺
姜丽楠
王连顺
刘洋
刘奇
刘圣聪
关键词:  红鳍东方鲀  性别决定因子  cDNA末端快速扩增技术  实时荧光定量PCR  基因表达    
Abstract: The full length cDNA of gsdf gene(Trgsdf,GenBank accession No.KR914667)was first cloned in redfin puffer Takifugu rubripeshis using rapid amplification of cDNA ends(RACE).The results showed that the Trgsdf gene had 1734 bp in length,with 144 bp of5′-untranslated region(UTR),942 bp of3′-UTR and 648 bp of the coding region encoding a 215 amino acids predicted protein.The predicted protein contained a signal peptide(19 amino acid long),a transmembrane region(19 amino acid long),an N-glycosylation site(NST)and a conserverd domain of the TGF-βsuperfamily.A BLAST search against the NCBIprotein database showed that the Trgsdf-encoding protein shared 26%-58%identity with the GSDF proteins found in other fish species.Phylogenetic analysis revealed that the fish GSDF proteins had a clade separated from the othermembers of the TGF-βsuperfamily.Moreover,the Trgsdf-encoding protein showed a higher similarity with themedaka Oryzias latipes GSDF and the protogynous wrasse Halichoeres trimaculatusgsdf as compared with the GSDF in other species.The expression pattern of Trgsdf in various tissues by RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)showed that therewas Trgsdf transcripts in both female and male redfin puffer,with a high expression level in ovary and testis,low expression level in skin andmuscle and withoutexpression in other tissues.Relative real-time PCR showed that there was significantly higher expression level of Trgsdf in testis than that in ovary(P<0.05).The findings suggest that GSDF might be involved in the development of gonad(especially in testis differention and development)in redfin puffer.
Key words:  Takifugu rubripes    gonadal soma derived factor(GSDF)    RACE    Real-Time PCR    gene expression
                    发布日期:  2016-12-30      期的出版日期:  2016-04-21
中图分类号:  S917.4  
引用本文:    
闫红伟, 田雨顺, 姜丽楠, 王连顺, 刘洋, 刘奇, 刘圣聪. 红鳍东方鲀gsdf基因的克隆及表达模式分析[J]. 大连海洋大学学报, 2016, 31(2): 140-146.
YAN Hong-wei, TIAN Yu-shun, JIANG Li-nan, WANG Lian-shun, LIU Yang, LIU Qi, LIU Sheng-cong. Cloning and expression profiling of the gsdf gene in red fin puffer Takifugu rubripes. Journal of Dalian Ocean University, 2016, 31(2): 140-146.
链接本文:  
https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/10.16535/j.cnki.dlhyxb.2016.02.004  或          https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/Y2016/V31/I2/140
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