2012年, 第27卷, 第6期　
刊出日期：2012-12-21

  

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  虾夷马粪海胆硬脂酰辅酶A去饱和酶和蛋白酪氨酸磷酸酶基因的克隆与表达

  丁君, 孙巍, 常亚青

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 489-494. https://doi.org/NULL

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  采用同源克隆方法,结合cDNA末端快速扩增 (RACE)技术,成功克隆了虾夷马粪海胆Strongylocentrotus intermedius硬脂酰辅酶A去饱和酶 (Stearoyl-coenzyme A desaturase,SCD)基因和蛋白酪氨酸磷酸酶 (Protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B)基因,并对其结构进行了分析,同时采用实时定量PCR方法对这两个基因在海胆胚胎不同发育时期的表达进行了研究。结果表明:SCD基因的cDNA序列全长为1 934 bp(Genbank登录号为HM208174),开放阅读框819 bp,编码273个氨基酸残基,存在跨膜结构和信号肽,为分泌性蛋白;实时定量PCR检测显示,SCD基因在虾夷马粪海胆八腕期表达量最高,在2细胞时期表达量最低。PTP1B基因的cDNA序列全长为1 249 bp(Genbank登录号为HM208173),开放阅读框657 bp,编码219个氨基酸残基,存在跨膜结构和信号肽,为分泌性蛋白;PTP1B基因在海胆2细胞时期表达量最高,在八腕期表达量最低。本研究为在分子水平上探讨海胆脂代谢过程中的基因功能提供了科学依据。
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  鳜胰岛素样生长因子-Ⅱ cDNA基因的克隆与表达特征

  刘俊, 赵金良, 张敏, 代威

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 495-501. https://doi.org/NULL

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  为全面获得鳜Siniperca chuatsi GH-IGFs生长发育轴的调控因子特征,采用RT-PCR、cDNA末端快速扩增 (RACE)技术成功克隆了肝组织胰岛素样生长因子-Ⅱ (IGF-Ⅱ)cDNA序列。结果表明:鳜IGF -ⅡcDNA全长为1 643 bp,包括5′端非翻译区103 bp、3′端非翻译区892 bp和开放阅读框648 bp,开放阅读框编码215个氨基酸;鳜IGF-Ⅱ前肽由信号肽、成熟肽和E肽3部分组成,其中信号肽为47个氨基酸,成熟肽为70个氨基酸,E肽为98个氨基酸;鳜IGF-Ⅱ氨基酸序列与其他脊椎动物的相似度为81%～98%,与鳜IGF-Ⅰ的相似度为62.5%。运用实时荧光定量PCR技术检测了鳜成鱼不同组织以及孵化后0～22 d仔稚鱼中IGF-ⅡmRNA的表达情况,结果表明:IGF-ⅡmRNA在鳜脑中表达量最高,在肌肉、心脏、胃、鳃、肾脏中表达量次之,在脾、前肠、后肠、性腺、肝脏中表达量较低;在孵化后早期发育阶段均检测到有IGF-ⅡmRNA表达,孵化当天 (0 d)表达量最高,之后表达量有所降低。本研究结果可为鳜IGF-Ⅱ对生长发育的调控作用研究提供科学依据。
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  双齿围沙蚕Hsp70 cDNA基因的克隆及序列分析

  李颖, 周一兵, 万良, 赵欢, 杨大佐

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 502-507. https://doi.org/NULL

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  根据已知巨型管状虫Riftia pachyptila热休克蛋白70(Hsp70)基因序列设计引物,应用同源克隆策略和RACE技术首次从双齿围沙蚕Perinereis aibuhitensis体壁肌肉中克隆获得Hsp70 cDNA序列。结果表明:双齿围沙蚕Hsp70 cDNA序列全长为2 336 bp,包括5′端非翻译区88 bp、3′端非翻译区286 bp和开放阅读框1 962 bp;整个开放阅读框编码653个氨基酸,包含Hsp70家族3个特征区域;通过生物信息学分析表明,该蛋白是一种无信号肽跨膜蛋白,理论等电点为5.14,相对分子质量为71 396,半胱氨酸 (Cys)含量为0.8%;同源性分析表明,双齿围沙蚕Hsp70氨基酸序列与其他真核生物的Hsp70序列具有很高的相似性。该研究结果可为进一步开发沙蚕Hsp70作为监测海洋污染的一种生物标记物提供重要的参考依据。
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  草鱼呼肠孤病毒VP5蛋白的表达与纯化

  方珍珍, 景宏丽, 江育林, 张利峰, 张旻, 李华

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 508-512. https://doi.org/NULL

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  从草鱼Ctenopharyngodon idellus出血病病原——草鱼呼肠孤病毒GCRV-873株扩增病毒的外壳蛋白(GCRV-VP5)基因,并将GCRV-VP5基因克隆到原核表达载体pET-30α,转化至大肠杆菌E.coli BL-21 (DE3)中后,用IPTG诱导培养,获得带有重组质粒菌体的总蛋白。用GCRV-873毒株免疫山羊得到的抗血清作为一抗进行免疫印迹试验,结果在硝酸纤维素膜上检测到在相对分子质量为77 000处有特异性免疫条带,与预测的GCRV-873 VP5蛋白一致,提示大肠杆菌融合表达草鱼出血病病毒的VP5蛋白。表达的融合蛋白主要以不可溶的包涵体形式存在,经柱层析纯化后蛋白纯度可达90%。本试验中获得的融合蛋白可为后期免疫动物提供了抗原,也为建立GCRV免疫学检测方法提供了依据。
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  历山中国大鲵线粒体片段序列的测定及其遗传差异研究

  黄立群, 仪慧兰, 崔松林, 郭军

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 513-517. https://doi.org/NULL

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  对山西历山2尾野生大鲵Andrias davidianus mtDNA中Cyt b和ATPase 6基因的部分序列进行了检测,并与GenBank中收集的14尾外地样本进行比较,用Mega 5.0软件对305 bp Cyt b片段和371 bp ATPase 6片段进行分析。结果表明:Cyt b片段有10个不同的单倍型,共检测出14个变异位点,占核苷酸总数的4.58%,其中有12个简约信息位点;ATPase 6片段有13个不同的单倍型,检测出30个变异位点,占核苷酸总数的8.09%,其中有18个简约信息位点,Cyt b比ATPase 6更为保守,但两序列中碱基组成均表现为鸟嘌呤缺乏 (＜18.9%),且多数变异发生在密码子第3位。合并序列构建的分子系统树表明,历山大鲵与陕西、四川及部分湖南个体聚为一支,历山大鲵与广西样本的遗传距离最远,与四川、陕西样本的遗传距离较近。
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  循环水养殖模式下养殖密度对青石斑鱼生长及生理指标的影响

  张曦文, 吴垠, 贺茹靖, 苏延明, 刘琦

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 518-522. https://doi.org/NULL

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  研究了循环水养殖模式下,不同养殖密度对青石斑鱼Epinephelus awoara生长及肝脏、鳃相关酶活性和血液指标的影响。试验设10、20、30 kg/m33个养殖密度组,每组设3个重复,在闭合循环水养殖系统(70 cm×40 cm×40 cm)中养殖初始体质量为 (108.7±4)g的青石斑鱼50 d。结果表明:1)10、20 kg/m3养殖密度组青石斑鱼的增重率、特定生长率均高于30 kg/m3密度组 (P＜0.05),但30 kg/m3密度组鱼的饲料系数高于其他两组 (P＜0.05);2)各组试验鱼血清的谷丙转氨酶 (GPT)、谷草转氨酶 (GOT)活性及肝脏和鳃的GPT活性均随着养殖密度的增加而明显升高,且组间有极显著性差异 (P＜0.01);3)各组试验鱼血清中的皮质醇含量随着养殖密度的增加而明显升高 (P＜0.01),而红细胞数则明显减少 (P＜0.01), 30 kg/m3密度组鱼的血红蛋白含量低于10、20 kg/m3密度组 (P＜0.05);4)各组鱼的肌肉营养组成均无显著性差异 (P＞0.05)。本试验结果表明,养殖密度过高对青石斑鱼生长不利,但从经济收益角度考虑,适宜的养殖密度应为20 kg/m3。
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  环境因子对毛蚶排遗和泥沙净化的影响

  杨凤, 刘丹, 于倩, 于帅, 杨坤, 刘婷, 闫喜武

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 523-527. https://doi.org/NULL

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  在实验室条件下,进行了温度、盐度和充气对毛蚶Scapharca subcrenata(Lischke)排遗及泥沙净化的影响试验。温度试验设10、15、20、25、30℃共5个梯度,毛蚶壳长为 (39.8±2.0)mm;盐度试验设自来水、10、15、20、25、30、35共7个梯度,毛蚶壳长为 (44.2±2.5)mm。结果表明:在盐度为30的天然海水中,10、15、20、25℃温度组的毛蚶均能正常排遗,10 h内排遗速率以20℃时最高,平均为(0.50±0.06)mg/(g·h),30℃组4 h全部死亡;在20℃条件下,20、25、30、35盐度组毛蚶均能正常排遗,10 h内排遗速率以盐度为25时最大,平均为 (0.64±0.02)mg/(g·h);不充气条件下的排遗速率大于充气条件下的排遗速率;毛蚶排遗速率在最初1 h内最快,平均为 (1.78±0.30)mg/(g·h),约占10 h内排遗总量的36%以上,之后随时间的推移基本呈指数递减;各种温度、盐度、充气和不充气条件下,毛蚶净化6 h后均口感无沙。
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  不同颜色光照对日本蟳摄食与生长的影响

  刘涵, 姜玉声, 栾攀, 王双耀, 迟建卫, 刘胥, 赵静

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 528-533. https://doi.org/NULL

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  研究了蓝光 (λ=436.67 nm±4.8 nm)、红光 (λ=625.38 nm±6.3 nm)、黄光 (λ=574.95 nm±6.1 nm)和绿光 (λ=547.43 nm±4.3 nm)对灰绿、暗红两种体色日本蟳Charybdis japonica成蟹 (头胸甲宽59.11～79.98 mm)和同家系仔蟹 (头胸甲宽8.9～9.8 mm)摄食与生长的影响。结果表明:体色灰绿的“花盖”在蓝光和绿光中的摄食频率均高于其在另外两种光色中的 (P＜0.05),而体色暗红的 “赤甲红”在红光中的摄食频率明显高于其在另外3种色光中的 (P＜0.01);绿光中仔蟹的成活率最高,但各颜色光照组间无显著性差异 (P＞0.05);绿光组仔蟹的蜕壳率最高,仅与自然光组仔蟹相比有显著性差异 (P＜0.05);绿光组仔蟹体质量的特定生长率 (SGR1)最大,明显高于其他各组 (P＜0.05或P＜0.01);绿光与黄光中仔蟹的摄食率 (FI)较低,但各组间无显著性差异 (P＞0.05);绿光组仔蟹的食物转化效率(FCE)最大,与红光组有显著性差异 (P＜0.05),与自然光组有极显著性差异 (P＜0.01)。
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  外源蛋白酶对虹鳟生长和肠道组织结构的影响

  张娟娟, 李小勤, 冷向军, 韩志英, 张飞鸽

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 534-538. https://doi.org/NULL

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  为考察饲料中添加蛋白酶对虹鳟Oncorhynchus mykiss生长性能、肌肉成分以及肠、胃蛋白酶活性和前肠组织结构的影响,配制了鱼粉含量为35%的高鱼粉饲料、鱼粉含量为28%的低鱼粉饲料 (补充赖氨酸、蛋氨酸达到与高鱼粉饲料一致的水平),以及在低鱼粉饲料中添加175 mg/kg蛋白酶PT的蛋白酶饲料,用3种饲料饲喂初始体质量为 (52.1±0.5)g的虹鳟60 d。结果表明:高鱼粉组、低鱼粉组和蛋白酶组虹鳟的增重率分别为98.46%、88.48%、96.82%,饲料系数分别为1.36、1.52、1.41,低鱼粉组虹鳟的增重率最低,饲料系数最高;在低鱼粉饲料中添加蛋白酶后,鱼体增重率提高了9.42%,饲料系数降低了7.80%(P＞0.05),且与高鱼粉组无显著性差异 (P＞0.05);各组虹鳟的肌肉成分间无显著性差异 (P＞0.05);与低鱼粉组相比,蛋白酶组虹鳟的胃、肠蛋白酶活性及肠道皱襞高度、面积均有所提高 (P＜0.05),达到了与高鱼粉组基本一致的水平。本研究结果表明,在虹鳟低鱼粉饲料中添加蛋白酶可提高胃、肠蛋白酶活性,改善肠道组织结构,改善鱼体生长性能。
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  翅碱蓬对滩涂湿地沉积物中重金属Cu、Pb的累积吸收

  何洁, 陈旭, 王晓庆, 刘长发, 周一兵

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 539-545. https://doi.org/NULL

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  以中国北方滩涂湿地优势种植物翅碱蓬Suaeda heteroptera Kitag为研究对象,以滩涂湿地沉积物为供试环境,通过盆栽试验研究了不同含量的重金属Cu(0、100、200、400 mg/kg)和Pb(0、200、400、600 mg/kg)对沉积物理化性质和翅碱蓬生物量的影响。试验在直径为10 cm的塑料花盆中进行,每天用盐度为15的稀释海水浇灌两次,翅碱蓬共栽培28 d,试验结束时测定翅碱蓬体内和沉积物中重金属的含量,并分析翅碱蓬对Cu和Pb的吸收规律和蓄积特征。结果表明:Cu和Pb均会抑制翅碱蓬的生长,但Pb含量为600 mg/kg的处理组中翅碱蓬的生物量有增加趋势,说明其在高浓度Pb胁迫下具有较强的耐Pb毒性能力;翅碱蓬各部位对Cu、Pb的蓄积顺序均为地下部分＞地上部分,并且随着沉积物中重金属含量的增加,翅碱蓬体内的Cu、Pb含量也增加。
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  坛紫菜赤腐病与拟油壶菌病并发病的初步研究

  刘一萌, 马家海, 文茜

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 546-550. https://doi.org/NULL

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  于2009—2012年,对福建省福鼎市、霞浦县、晋江市和浙江省苍南等地的坛紫菜病烂状况进行了调查研究,根据发病特征及镜检观察确定,坛紫菜病烂的主要原因为紫菜腐霉Pythium porphyrae以及拟油壶菌Olpidiopsis sp.感染引起的赤腐病和拟油壶菌病并发病。紫菜腐霉感染引起的赤腐病,发病过程为紫菜腐霉菌丝侵染坛紫菜细胞,被感染的坛紫菜细胞由红色转绿色、黄绿色,直至腐烂破碎、萎缩死亡,菌丝浸染坛紫菜5～7 d后,部分菌丝体上形成孢子囊,孢子囊释放肾脏状、双鞭毛游动孢子,进行无性生殖,并在一定条件下生成藏精器和藏卵器,进行有性生殖,并感染其他紫菜细胞。拟油壶菌感染引起的拟油壶菌病,发病过程为菌体侵入坛紫菜细胞内,成熟后形成孢子囊,致使坛紫菜细胞裂解,孢子囊释放游动孢子并感染其他坛紫菜细胞。本研究结果表明,增加干出时间、降低栽培密度、远离河口栽培以及采用冷藏网技术等措施可在一定程度上降低赤腐病以及拟油壶菌病造成的危害。
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  建鲤急性肝损伤模型的建立及当归提取物的保肝和抗氧化作用研究

  曹丽萍, 贾睿, 丁炜东, 杜金梁, 殷国俊

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 551-557. https://doi.org/NULL

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  通过四氯化碳 (CCl4)诱导建鲤Cyprinus carpio var.Jian肝损伤并建立急性肝损伤模型,以研究当归提取物 (Extract from Angelica sinennsis,EAS)对肝脏组织的保护和抗氧化作用。采用CCl4腹腔注射法造模,分别测定不同时间和剂量下建鲤血清中谷丙转氨酶 (GPT)、谷草转氨酶 (GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性及丙二醛 (MDA)的含量,确定出建模的合适注射浓度和作用时间;用添加0.5%和1.0% (质量分数,下同)的EAS饲料,预防性喂养建鲤60 d后,通过测定鲤血清和肝脏组织中相关生化指标来观察EAS的保肝和抗氧化作用。结果表明:用体积分数为15.00%的CCl4-橄榄油一次性腹腔注射 (剂量为0.1 mL/10 g体质量)建鲤72 h后,能诱导鲤血清中GPT、GOT和LDH活性显著性升高 (P＜0.05), MDA大量生成;投喂含0.5%和1.0%的EAS饲料均能显著抑制CCl4致建鲤血清中GOT、GPT和LDH活性的升高 (P＜0.05),提高血清中总蛋白 (TP)、白蛋白 (Alb)含量及肝组织总抗氧化能力 (T-AOC),抑制肝组织匀浆中超氧化物歧化酶 (SOD)水平下降;同时,0.5%的EAS还能显著恢复血清中SOD水平和肝组织中谷胱甘肽 (GSH)水平,抑制MDA生成。本研究结果表明,EAS对CCl4诱导的建鲤肝组织损伤具有保护作用,该作用与EAS的清除自由基和抗氧化能力有关。
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  怀头鲇胃黏膜蛋白酶分离提纯条件的筛选

  刘伟, 曾真, 战培荣

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 558-563. https://doi.org/NULL

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  采用两种硫酸铵饱和梯度盐析方法对怀头鲇Silurus soldatovi胃黏膜蛋白酶激活液进行粗提,用6种组合层析条件对胃蛋白酶粗提液进行Sephadex G-75凝胶过滤层析,获得初步纯化的蛋白酶,并通过蛋白质浓度、蛋白酶活力及SDS-PAGE凝胶电泳对其分析鉴定。结果表明:在28%、56%、83%(NH4)2SO4饱和度条件下分级盐析效果比较理想;不同层析条件下层析峰分离液的蛋白酶活力测定均显示出酶活性,层析峰蛋白酶比活力较粗提液提高5～9倍,60 cm柱 (层析柱高52 cm、直径1.6 cm)层析峰分离效果较好。从盐析粗提液电泳结果,以及在60 cm层析柱、pH为3.3的0.01 mol/L β-丙氨酸-甲酸缓冲液、0.8 mL/min流速条件下的层析峰蛋白分管收集液酶活力峰值和层析峰峰顶形状判断,怀头鲇胃蛋白酶可能有两种蛋白组分存在,并测得相对分子质量为26 000～47 000。
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  海带岩藻黄素对油脂氧化的抑制作用研究

  任丹丹, 李景娟, 李佰磊, 陈倩, 汪秋宽

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 564-566. https://doi.org/NULL

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  采用有机溶剂从海带Laminaria japonica中提取海带类胡萝卜素,分离纯化后通过过氧化值 (POV)法和共轭双键氢过氧化物 (CDHP)法,研究岩藻黄素对猪油自动氧化和大豆油光敏氧化的影响。结果表明:海带岩藻黄素能抑制猪油的自动氧化,且岩藻黄素和L-抗坏血酸 (VC)有很好的协同抗氧化作用;在较低岩藻黄素含量范围内,岩藻黄素能抑制豆油光敏氧化,且随岩藻黄素含量的增加抑制作用增强,当岩藻黄素增加到一定量时 (≥0.0025%),表现出促氧化作用。本研究结果表明,POV法和CDHP法具有很好的线性相关性,可采用方便快速的CDHP法衡量油脂的过氧化指标。
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  天津海域春夏季鱼卵、仔稚鱼的种类组成与数量分布

  谷德贤, 宓慧菁, 刘茂利, 刘国山

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 567-571. https://doi.org/NULL

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  于2008年5—8月对天津海域的鱼卵、仔稚鱼进行了4个航次的调查,共采集到鱼卵26 654粒,仔稚鱼20 534尾,隶属于7目12科25种。鱼卵和仔稚鱼的平均密度分别为1.70、1.18 ind./m3;5月份鱼卵和仔稚鱼最多,6月份次之,8月份最少;与历史资料比较,5月份仍是天津海域鱼类的产卵高峰期,但5月份鱼卵和仔稚鱼所占比例有所下降;南部中心产卵场位置变化不大,北部中心产卵场向北移动。本研究结果表明,近年来天津海域鱼卵、仔稚鱼的种类和数量呈减少趋势,产卵场出现退化现象。
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  立方体人工鱼礁背涡流的三维涡结构

  李晓磊, 栾曙光, 陈勇, 张瑞瑾

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 572-577. https://doi.org/NULL

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  以立方体人工鱼礁为例,应用CFD软件对其在定常流作用下的三维流场进行了数值模拟试验,以揭示立方体人工鱼礁背涡流的三维涡结构。结果表明:流过礁体侧面的水体在礁体后形成两个对称的旋转方向相反的展向涡,流经礁体上表面的水体脱落后形成一个尺寸与礁体尺寸相当的流向涡,展向涡宽度决定背涡流流场宽度,流向涡高度决定背涡流流场高度;展向涡和流向涡长度近似相等,二者的长度共同决定背涡流流场的长度;展向涡、流向涡共同构成了人工鱼礁背涡流的三维涡结构。
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  基于图像处理技术的扇贝尺寸及位置自动识别

  郭常有, 曹广斌, 韩世成, 蒋树义

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 578-582. https://doi.org/NULL

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  准确识别扇贝的大小和位置是实现扇贝自动化分级操作的首要条件。本研究中,应用图像处理技术对扇贝进行定位和识别,首先将采集到的扇贝彩色图像转换为灰度图,并通过阈值分割转变为二值图像,再通过滤波减少图像噪声,然后采用改进的OPTA算法和边界追踪算法提取扇贝图像边界,最后通过计算扇贝图像边界各点相对距离的最大值识别其尺寸,通过计算中心点得到位置坐标。实验结果表明,将图像处理技术用于扇贝的自动分类时,能够有效地完成扇贝的定位和尺寸识别,且计算量小,易于实现。
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  基于水下三维结构光的视觉测量方法研究

  李擎, 何东钢, 李响

  大连海洋大学学报. 2012, 27(6): 583-586. https://doi.org/NULL

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  基于结构光测量和小孔成像视觉的特点,用摄像机和投影仪所组成的三维结构光测量系统来进行水下三维视觉测量并获得水下空间中特征点的三维信息。利用结构光的双目视觉方法实现了对物体的三维测量,在世界坐标系中建立了此方法的数学模型,并获得摄像机和投影仪的内外参数。实验证明,当目标物体放置在距离摄像机光心2.50 m处,摄像机和投影仪光心相距为26.50 cm时,进行深度测量的精度可以达到0.5 mm,基本满足测量需求。