2010年, 第25卷, 第3期　
刊出日期：2010-06-21

  

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  中华绒螯蟹血细胞cDNA文库的构建及质量初检

  赵大显, 张浩, 吴萍, 陈立侨

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 191-196. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.001

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  为了筛选中华绒螯蟹Eriocheir sinensis血细胞免疫的相关基因,促进蟹类免疫防治的进展,采用Gubler-Hoffman法构建了中华绒螯蟹血细胞的cDNA文库。结果表明：该文库初始滴度为4.50×106cfu/mL,库容为3.3×106cfu/mL,重组率为73%,插入片段大小多为800~2 500 bp。随机挑取了94个重组子进行测序初检,共得到93条平均长度为511 bp的表达序列标签（EST）序列,对所测EST序列进行拼接,得到75条一致性序列,包括15条重叠群（Contigs）和60条单一序列（Singleton）。对测序结果进行比对分析,获得了15条已报道有一定功能的一致性序列,其中4条与免疫相关;另外60条一致性序列还未见报道。研究表明,中华绒螯蟹血细胞cDNA文库已构建成功,且质量较高,从而为开展中华绒螯蟹功能基因克隆、分析和功能基因组学研究奠定了基础。
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  芙蓉鲫(芙蓉鲤♀×红鲫♂)及其原始亲本间的遗传关系

  王金龙, 刘臻, 李传武, 王冬武, 曾国清, 鲁双庆

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 197-202. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.002

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  利用RAPD和微卫星标记技术,对芙蓉鲫及其原始亲本（红鲫、芙蓉鲤、散鳞镜鲤、兴国红鲤）5个群体的遗传关系进行研究。利用20条随机引物进行RAPD分析,其中12条在5个群体中均能扩增出特异条带。统计分析显示：芙蓉鲫与红鲫、芙蓉鲤、散鳞镜鲤、兴国红鲤的遗传相似性分别为0.8757、0.7478、0.7419、0.7449,遗传距离分别为0.1327、0.2906、0.2985、0.2944。在进行微卫星标记分析时,所扩增的29对微卫星引物中共有13对在5个群体中均能扩增出特异条带。统计分析显示,芙蓉鲫与红鲫、芙蓉鲤、散鳞镜鲤、兴国红鲤的遗传相似性分别为0.8717、0.7434、0.6680、0.7552,遗传距离分别为0.1374、0.2965、0.4034、0.2808。两种分析结果均表明,芙蓉鲫的遗传结构更接近于父本红鲫,与外祖父兴国红鲤的遗传相似性比与外祖母散鳞镜鲤的遗传相似性要大,其遗传结构更偏向于具红色体征的原始亲本。
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  底栖硅藻种类和密度对仿刺参幼体和稚参生长与成活的影响

  王吉桥, 丛文虎, 姜玉声, 张剑诚, 黄万成

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 203-209. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.003

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  在水温为22.0~26.0℃下,研究了不同密度的圆筛藻Coscinodiscus sp.、舟形藻Navicula sp.和双肋藻Amphipteura sp.及其等比例组合对仿刺参Apostichopus japonicus体长为400~500μm的樽形幼体变态、附着及生长和成活的影响。结果表明：在单一硅藻组中,圆筛藻组幼体的附着率最高（13.3%±2.2%）,显著高于舟形藻（6.9%±1.8%）和双肋藻组（5.9%±0.7%）（P〈0.05）;混合硅藻组的附着率均高于单一硅藻组,其中圆筛藻＋舟形藻组幼体的附着率（23.2%±3.2%）显著高于对照组（18.0%±2.16%）（P〈0.05）。混合藻类密度为1~25万个/cm2时,幼体的附着率（27.2%±4.28%）均显著高于对照组（P〈0.05）。经过46 d的饲养,单一和混合藻类组幼参的最终体长（P〈0.01）和成活率（P〈0.05）均显著低于对照组。稚参变态附着后至体长为700~800μm的10 d内,以3种混合底栖硅藻为食物,之后以营养来源丰富的人工饵料为食,可明显提高仿刺参的生长速度和育苗成活率。
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  哈维氏弧菌灭活疫苗在养殖大黄鱼中的应用与评价

  沈锦玉, 许文军, 尹文林, 曹铮, 潘晓艺, 施慧, 郝贵杰

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 210-213. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.004

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  在水温为22.0~26.0℃下,研究了不同密度的圆筛藻Coscinodiscus sp.、舟形藻Navicula sp.和双肋藻Amphipteura sp.及其等比例组合对仿刺参Apostichopus japonicus体长为400~500μm的樽形幼体变态、附着及生长和成活的影响。结果表明：在单一硅藻组中,圆筛藻组幼体的附着率最高（13.3%±2.2%）,显著高于舟形藻（6.9%±1.8%）和双肋藻组（5.9%±0.7%）（P〈0.05）;混合硅藻组的附着率均高于单一硅藻组,其中圆筛藻＋舟形藻组幼体的附着率（23.2%±3.2%）显著高于对照组（18.0%±2.16%）（P〈0.05）。混合藻类密度为1~25万个/cm2时,幼体的附着率（27.2%±4.28%）均显著高于对照组（P〈0.05）。经过46 d的饲养,单一和混合藻类组幼参的最终体长（P〈0.01）和成活率（P〈0.05）均显著低于对照组。稚参变态附着后至体长为700~800μm的10 d内,以3种混合底栖硅藻为食物,之后以营养来源丰富的人工饵料为食,可明显提高仿刺参的生长速度和育苗成活率。
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  月相和延绳钓不同投绳时间对大眼金枪鱼和黄鳍金枪鱼渔获率的影响

  宋利明, 张智

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 214-218. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.005

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  利用2005年（1—12月）伯利兹船队在帕劳群岛共和国生产作业的渔捞日志数据,采用方差分析的方法（ANOVA）比较了月光天（农历初八至二十二）与月黑天（初一至初七、初二十三至三十）、不同投绳时间之间大眼金枪鱼Thunnus obesus和黄鳍金枪鱼Thunnus albacares渔获率的差异。结果表明：大眼金枪鱼、黄鳍金枪鱼渔获率在月光天和月黑天均无显著性差异;大眼金枪鱼渔获率在不同投绳时间存在显著性差异,而黄鳍金枪鱼的渔获率则无显著性差异。研究认为,月相对大眼金枪鱼、黄鳍金枪鱼渔获率无显著影响。为了获得较高的大眼金枪鱼渔获率,实际作业中应选择02：00—08：00（当地时间）作为投绳时间。
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  体外药动模型中诺氟沙星对嗜水气单胞菌

  陈俭清, 卢彤岩

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 219-223. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.006

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  通过建立体外药动模型的方法,研究诺氟沙星对嗜水气单胞菌Aerom onas hydrophila的药动-药效（简称PK-PD）参数。结果表明：在消除半衰期为3.4 h的模型内,2M IC（最小抑菌浓度）、4M IC和8M IC的诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够抑制4 h,4 h后细菌出现再生长,而16M IC的诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用;在消除半衰期为77 h的模型内,2M IC的诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够抑制4 h,4 h后细菌出现再生长,而4M IC、8M IC和16M IC对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用。消除半衰期为3.4 h的模型内,当AUC0→24 h/M IC（药时曲线下面积与最小抑菌浓度的比值）〉42.43±9.21,Cm ax/M IC（峰浓度与最小抑菌浓度的比值）〉15.78±0.22时,诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用;消除半衰期为77 h的模型内,当AUC0→24 h/M IC〉41.87±10.16,Cm ax/M IC〉4.79±0.11时,诺氟沙星对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用。
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  κ-卡拉胶寡糖对仿刺参溶菌酶、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性的影响

  马悦欣, 许珂, 王银华, 王斌, 宋坚, 常亚青

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 224-227. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.007

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  采用10 g/L的两种κ-卡拉胶寡糖对仿刺参Apostichopus japonicus进行体壁注射刺激后,测定其体腔液中溶菌酶（LSZ）、碱性磷酸酶（AKP）和超氧化物歧化酶（SOD）活性的动力学变化。结果表明：在注射κ-卡拉胶寡糖后的第1天,1、2号寡糖组的LSZ活性达到最高,分别是对照组的7.0和6.0倍,极显著高于对照组（P〈0.01）;AKP活性于注射后第2天增至最高,1、2号寡糖组的酶活性分别是对照组的1.9和2.6倍,前3天试验组的酶活性显著高于对照组（P〈0.05）;1号寡糖组的SOD活性于注射后第2天达到最高,然后逐渐下降,而2号寡糖组的酶活性第2天呈现增加,第5天达到最高,1、2号寡糖组的酶活性最高时分别是对照组的2.0倍和2.3倍,且极显著高于对照组（P〈0.01）。非参数检验分析表明,1、2号寡糖组3种酶活性变化趋势与对照组差异极显著（P〈0.01）,说明κ-卡拉胶寡糖具有增强仿刺参免疫活性的作用。
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  饵料浮游动物种类和密度对海月水母摄食和生长的影响

  杨为东, 赵文, 李多慧, 滕力平, 杨担光, 袁霞, 韩婷婷

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 228-232. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.008

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  研究了5种浮游动物（卤虫Artemia无节幼体、大尾猛水蚤Harpacticus uniremis、短角异剑水蚤Apo-cyclops royi、蒙古裸腹溞Moina mongolica和褶皱臂尾轮虫Brachionus plicatilis）饵料对海月水母Aurelia aurita摄食和碟状体生长的影响。结果表明：海月水母摄食卤虫无节幼体没有明显的节律性,对蒙古裸腹溞、大尾猛水蚤、短角异剑水蚤和褶皱臂尾轮虫都是在上午8：00摄食量最大;海月水母对卤虫无节幼体和轮虫的个体摄食率最大,分别为42.8、42.0个/（个.h）。摄食卤虫无节幼体的海月水母碟状体的生长率最大,达到8.8%~11.2%;摄食蒙古裸腹溞和大尾猛水蚤的次之,生长率分别为4.4%~6.1%和3.1%~5.2%;摄食褶皱臂尾轮虫的碟状体生长率极低,仅为0.3%~0.4%。研究表明,卤虫无节幼体、蒙古裸腹溞和大尾猛水蚤均可作为篢滤傅刺宓亩？合适投喂密度分别为550~700、150~300个/L和250~450个/L。
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  用Protein A亲和层析法快速分离纯化鲫血清IgM方法的建立和应用

  吴光辉, 王庆, 巩华, 石存斌, 李华, 吴淑勤

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 233-237. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.009

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  采用Protein A亲和层析法对鲫Carassius auratus血清中的IgM进行快速分离纯化,所得产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹（Western blotting）进行分析检测。结果表明：采用Protein A亲和层析法可以很好地分离到高纯度的鲫血清IgM,电泳条带中重链和轻链清晰可辨,重链、轻链的相对分子质量分别为85 000、25 000左右,无明显杂带;利用纯化的鲫血清IgM免疫小鼠,获得了高效价抗IgM抗血清,可以特异性识别鲫血清和黏液中IgM重链。应用间接ELISA方法对浸泡免疫后的鲫血清和皮肤黏液中抗体的动态进行检测,结果显示：鲫皮肤黏液中的抗体滴度在免疫后第6天达到峰值,血清中抗体滴度在免疫后第15天达到峰值,前者高峰期出现较早,但持续时间短,后者高峰期出现较晚,但持续时间较长。本试验中所建立的Protien A亲和层析法为鱼类抗体制备、病原检测及免疫学相关研究提供了一种便捷的方法。
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  河口区养殖菊黄东方鲀的胚胎发育

  施永海, 张根玉, 朱雅珠, 刘建忠, 臧维玲

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 238-242. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.010

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  通过对河口区养殖菊黄东方鲀Takifugu flavidus胚胎发育的连续观察,研究了菊黄东方鲀胚胎发育的时序和特点。结果显示,菊黄东方鲀受精卵呈淡黄色或柠檬色,沉性并具有弱黏性,球形,卵径为（1.09±0.03）mm,油球多个且大小不一。根据胚胎的主要特征,胚胎发育分为胚盘形成阶段、卵裂阶段、囊胚阶段、原肠期阶段、神经胚阶段、器官形成阶段和出膜阶段7个阶段及27个发育时期,在温度为21.0-22.5℃、盐度为13.0-13.5的条件下,历时107 h 10 m in仔鱼出膜。初孵仔鱼全身透明,全长为（2.75±0.07）mm,肛前长为（1.45±0.06）mm,体高为（1.12±0.10）mm,卵黄囊近椭圆形,长径为（1.02±0.06）mm,短径为（0.96±0.04）mm。
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  深圳杨梅坑人工鱼礁区投礁前后大型底栖动物种类组成的变化

  斯广杰, 陈丕茂, 杜飞雁, 陈勇, 贾晓平

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 243-247. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.011

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  根据深圳杨梅坑人工鱼礁区投礁前（2007年4月）和投礁后（2008年5月）2个航次调查所获底泥中大型底栖动物的资料,探讨了人工鱼礁对大型底栖动物种类组成的影响。结果表明：投礁一年后,人工鱼礁对大型底栖动物的养护作用已初步显现,海域内大型底栖动物种类数由投礁前的20种提高到34种,环节动物的比例有所增加;投礁后海域内大型底栖动物群落的种类组成也发生了较大变化,投礁前后的种类相似性仅为23.3%,优势种发生了较为明显的变化,由投礁前的方格皱纹蛤Periglypta lacerate变为投礁后的方格皱纹蛤Periglypta lacerate、弦毛内卷齿蚕Aglaophamus lyrochaeto和单鳃虫Nothria holobranchiata。
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  印度洋中南部长鳍金枪鱼生物学特性的研究

  李攀, 许柳雄, 朱国平, 陈锦淘

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 248-252. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.012

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  根据2008年9月—2009年4月印度洋中南部金枪鱼延绳钓渔场所捕获的长鳍金枪鱼Thunnus alalun-ga数据,对该鱼种的生物学特征进行了分析。结果表明：1）叉长为74~120 cm,优势叉长为105~110cm,约占总数的47.8%,平均叉长为（107.2±4.99）cm。2）长鳍金枪鱼叉长（LF,cm）与加工后重（WD,kg）的关系可表达为WD=1.7146×10-5LF3.0197（总体）,WDM=7×10-5L2F.M7229（雄性）,WDF=2×10-6L3F.F5354（雌性）。3）调查期间,长鳍金枪鱼性腺成熟度以Ⅳ级为主,约占总数的43.1%。4）当长鳍金枪鱼叉长小于100 cm时,摄食等级以0级和2级为主;当叉长为100~120 cm时,空胃率达39%以上,且随叉长的增长而递增。当叉长为91~110 cm时,摄食饱满指数随叉长增长而上升;当叉长为111~120 cm时,饱满指数随叉长递增而降低。
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  小型水库不同蚌、鱼混养模式排放水的水质分析

  张根芳, 许式见, 刘其根, 李家乐, 方爱萍

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 253-259. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.013

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  于2008年5月—11月,以不同蚌、鱼混养模式的6座小型水库为研究对象,比较分析了各水库排放水的水质指标。结果表明：各水库中的pH差异不显著,变动范围为8.0~8.7;红旗水库中NO2-N含量显著低于横塘水库和七里垅水库（P〈0.05）;后垄水库中NO3-N含量显著高于红旗水库和七里垅水库（P〈0.05）;横塘水库中总氨氮（TAN）、无机氮（DIN）、总氮（TN）除与七里垅水库差异不显著外,均显著高于其它水库（P〈0.05）;横塘水库中PO4-P含量除与后垄、七里垅水库差异不显著外,显著高于其它水库（P〈0.05）;横塘水库中总磷（TP）和CODMn含量除与后垄水库差异不显著外,均显著高于其它水库（P〈0.05）。除此之外,其它水库间这些水质指标的差异均不显著（P〉0.05）。其中人工投饵型蚌、鱼养殖水库排放水中CODMn、TAN、TN和TP含量较施有机肥型蚌、鱼养殖水库分别下降40.9%、73.6%、42.0%和97.1%;水库排放水DIN中主要以TAN形态存在,而TN中主要以DIN形态存在;各水库排放水同一水质指标的季节变化规律基本一致。
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  乌鳢微卫星DNA分子标记的分离及筛选

  温晓曦, 孙效文

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 260-264. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.014

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  利用磁珠富集法结合放射性同位素杂交方法分离乌鳢Ophiocephalus argus的微卫星分子标记,共获得阳性克隆1 200个,从中挑选466个进行测序,得到400个含有微卫星的序列（占86.6%）。结果表明：完美型微卫星座位325个,占76.11%;非完美型微卫星座位75个,占17.57%;复合型微卫星座位27个,占6.32%。在得到的微卫星序列中,重复单元除CAG/GTC外,还观察到二碱基重复单元。根据侧翼序列设计引物139对,选择合成50对,通过优化PCR反应条件,结果有27对引物可扩增出清晰可重复的目的条带,19对引物在黑龙江群体、山东群体乌鳢的DNA样本中表现出多态性。
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  黑尾近红鲌人工繁殖及胚胎发育的研究

  殷海成, 吕海英

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 265-269. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.015

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  对人工驯化的黑尾近红鲌Anoherythroculter nigrocauda进行人工药物催情、产卵和孵化,并连续观察其胚胎发育全过程。结果表明：用激素PG＋HCG＋LRH-A2、HCG＋LRH-A2＋DOM、PG＋LRH-A2＋DOM、HCG＋LRH-A2组合催产,催产率均为100%,受精率为72.4%~97.9%,孵化率为63.8%~80.4%。黑尾近红鲌的胚胎发育时序和特征与斑马鱼Danio rerio相似,可分为7个时期。受精卵为黏性,呈淡黄色,圆形,直径为（0.94±0.05）mm。在水温为23.4~25.3℃条件下,受精卵经过25 min开始胚胎发育,45 min进入2细胞期,5 h 15 min进入囊胚期,7 h 25 min进入原肠期,10 h 15 min进入神经胚期,50 h 50%以上的仔鱼孵出。刚出膜的仔鱼体长为（4.10±0.02）mm。
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  大泷六线鱼链球菌病的病原及其防治

  冯春明, 景宏丽, 李莹, 李强, 李华

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 270-274. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.016

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  2008年9月,辽宁省某养殖场养殖的大泷六线鱼Hexagrammos otakii暴发链球菌病,患病鱼鳃盖内侧发红,体表无明显症状。对病鱼进行细菌分离,从脑部分离出纯度较高的细菌,并经人工感染试验确定了该菌的致病性。对该细菌进行形态观察、生理生化特征比较及16S rRNA分子鉴定,测定了16S rRNA基因序列,并构建系统发育树。结果表明,该致病菌（ZG0990）与海豚链球菌Streptococcus iniae的相似性最高（99.48%）。药敏试验表明,该致病菌对青霉素G、先锋Ⅴ和呋喃妥因等多种药物敏感,并且将青霉素G按质量分数为0.1%的量拌饲投喂病鱼,取得了良好的治疗效果。
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  从小球藻中提取和富集多不饱和脂肪酸的研究

  陈炜, 王保刚, 李晓东, 白永安, 张敏

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 275-280. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.017

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  研究了从海水小球藻Chlorellaspp.中提取和富集多不饱和脂肪酸（PUFA）的方法,就提取剂体系、用量、提取次数等对小球藻粗脂肪提取率的影响以及尿素包合法中尿素、甲醇与脂肪酸甲酯的质量比对PUFA、EPA富集效果的影响进行了研究。结果表明：采用氯仿-甲醇提取剂体系,结合超声波萃取法,小球藻粗脂肪的提取率最高,提取次数为两次比较合适,与标准溶剂量相比,总溶剂量可减少42%。在室温（20~22℃）下,尿素与脂肪酸甲酯的质量比为6∶1,尿素与甲醇的质量比为1∶4时,PUFA占总脂肪酸的含量由脲包前的50%提高到82.9%;EPA占总脂肪酸的的含量由脲包前的39%提高到71.6%,EPA富集系数为1.84。
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  工厂化养殖条件下仿刺参不同生长阶段呼吸代谢的特征研究

  周玮, 田甲申, 吴比, 张弼

  大连海洋大学学报. 2010, 25(3): 281-284. https://doi.org/10.3969/j.issn.1000-9957.2010.03.018

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  于2008年6月—2009年5月对不同生长阶段仿刺参Apostichopus japonicus的代谢率进行了跟踪观测。结果表明,温度对不同生长阶段仿刺参的耗氧率和排氨率均有显著影响（P〈0.05）,相同温度下,体重对耗氧率和排氨率的影响也有规律性。A、B组仿刺参（12 g以下）在12.7~16.2℃下,耗氧率和排氨率缓慢上升;在16.2~22.1℃下迅速上升,并在22.1℃时达到最大值[（37.13±1.33）、（35.38±0.55）μg/（g.h）和（0.55±0.054）、（0.54±0.053）μg/（g.h）];在22.1~26.1℃下缓慢下降。与之相反,其他3组仿刺参（18 g以上）在12.7~16.2℃下其耗氧率和排氨率平稳上升,在16.2℃时达到最大值;在16.2~22.1℃下,迅速下降到较低水平;在22.1~26.1℃下,在较低水平上平稳下降,26.1℃时达到最低值。