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大连海洋大学学报  2014, Vol. 29 Issue (5): 454-458    DOI: 10.3969/J.ISSN.2095-1388.2014.05.006
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鲤春病毒血症病毒糖蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备
张家林,李强,叶仕根,李华
大连海洋大学 辽宁省海洋生物资源恢复与生境修复重点实验室，辽宁 大连 116023
Prokaryoticexpressionofglycoproteinandpreparationofmonoclonalantibodyinspringviremiaofcarpvirus(SVCV)
ZHANG Jia-lin，LI Qiang，YE Shi-gen，LI Hua
Key Laboratory of Marine Bio-resources Restoration and Habitat Reparation in Liaoning Province, Dalian Ocean University, Dalian 116023, China
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摘要 利用原核表达系统表达纯化鲤春病毒血症病毒(SVCV)G蛋白，制备特异性单克隆抗体，扩增出鲤春病毒0504分离株G基因片段，并将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中，经诱导表达、裂解离心包涵体，包涵体经His Bind亲和层析柱纯化及尿素浓度梯度复性后，作为抗原免疫Balb/c小鼠，制备单克隆抗体。结果表明：成功筛选出2株稳定分泌G蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为1C5、2D5，经Western-Blot检测表明，制备的单克隆抗体具有良好的特异性。本研究中成功制备的抗G蛋白单克隆抗体，可为建立新型鲤春病毒检测方法提供工具。
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张家林
李强
叶仕根
李华
关键词:  鲤春病毒血症病毒(SVCV)  G蛋白  原核表达  单克隆抗体    
Abstract: The fragment of G gene isolated from spring viremia of carp virus (SVCV, 0504) was cloned into the pET-28a(+) vector. The aimed protein was expressed after induction and lysed by concentration,then the G inclusion bodies were purified with Ni-NTA affinity column and renaturalized by the urea dialyzation way. The Balb/c was immuned by the recombinant glycoprotein and prepared for monoclonal antibody. Two hybridoma cell lines that secreted anti-G MAb were obtained successfully, named as 1C5, and 2D5. Western-Blot showed that the MAbs reacted specifically with recombinant glycoprotein, which laid foundation for the establishment of the new SVCV detection methods.
Key words:  spring viraemia of carp virus (SVCV)    glycoprotein    prokaryotic expression    monoclonal antibody
                    发布日期:  2016-12-30      期的出版日期:  2014-10-21
中图分类号:  Q786  
引用本文:    
张家林, 李强, 叶仕根, 李华. 鲤春病毒血症病毒糖蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备[J]. 大连海洋大学学报, 2014, 29(5): 454-458.
ZHANG Jia-lin, LI Qiang, YE Shi-gen, LI Hua. Prokaryoticexpressionofglycoproteinandpreparationofmonoclonalantibodyinspringviremiaofcarpvirus(SVCV). Journal of Dalian Ocean University, 2014, 29(5): 454-458.
链接本文:  
https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/10.3969/J.ISSN.2095-1388.2014.05.006  或          https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/Y2014/V29/I5/454
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