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大连海洋大学学报  2015, Vol. 30 Issue (6): 598-603    DOI: 10.16535/j.cnki.dlhyxb.2015.06.005
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红鳍东方鲀白介素15的原核表达及其活性测定
孙赛红,马普,李慧,孙鹤,孔德荣,李凤华,仇雪梅,姜志强,刘海映
大连海洋大学水产与生命学院 大连三仪动物药品有限公司 大连海洋大学海洋科技与环境学院 大连天正实业有限公司
Prokaryotic expression and biological activity evaluation of recombinan IL15 from tiger pufferfish Takifugu rubripes
SUN Sai-hong,MA Pu,LI Hui,SUN He,KONG De-rong,LI Feng-hua,QIU Xue-mei,JIANG Zhi-qiang,LIU Hai-ying,LIU Sheng-chong,WANG Xiu-li
1.College of Fisheries and Life Science, Dalian Ocean University, Dalian 116023, China; 2. Dalian Sanyi Animal Medicine Co. , Ltd. , Dalian 116036, China; 3. College of Marine Seience and Environment, Dalian Ocean University, Dalian 116023, China; 4. Dalian Tianzheng Industrial Corporation Limited, Dalian 116011, China
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摘要 为了开发红鳍东方鲀Takifugu rubripes免疫基因及其重组表达,生产重组免疫因子蛋白,通过提取红鳍东方鲀肾脏组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增得到白介素15(interleukin15,IL15)基因序列,将IL15成熟肽序列与原核表达载体p ET-32a(+)连接,成功构建重组表达载体(重组子)p ET-32a(+)-IL15,并将其重组子转化至Escheria coli BL21(DE3)感受态细胞中获得重组表达IL15的基因工程菌,再经IPTG诱导,p ET-32a(+)-IL15在BL21中得到了融合表达。结果表明:通过对表达产物的纯化和Western Blotting检测,红鳍东方鲀IL15在大肠杆菌中的表达量较高,蛋白浓度为294.6μg/m L;用MTT法对该蛋白进行活性鉴定显示,加入稀释10倍和100倍的重组红鳍东方鲀IL15蛋白时,CTLL-2细胞的增殖率相对较高,分别为71%和73%。研究表明,重组红鳍东方鲀IL15蛋白具有体外促进CTLL-2细胞增值的能力。
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关键词:  红鳍东方鲀  白介素-15  原核表达  活性鉴定    
Abstract: To exploit recomibinant protein of tiger pufferfish Takifugu rubripes by expression of immune gene and recominant immune factors,the tiger pufferfish interleukin-15(IL15) gene sequence was obtained from kidney tissue by RT-PCR,and the recombinant DNA p ET-32a(+)-IL15 was constructed by link mature peptide gene sequences and prokaryotic expression vector p ET-32a(+).The genetic engineering bacteria of recombinant expression IL15 by transforming p ET-32a(+)-IL15 into Escheria coli BL21(DE3),and the fusion proteins were obtained under the induction of IPTG.The purification of the express products and Western Blotting test revealed that there was high-efficiency expression of recombinant DNA p ET-32a(+)-IL15 in E.coli with the accurate target protein,and fusion protein concentration of 294.6 μg / m L.The evaluation of fusion protein activity by MTT method showed that the CTLL-2 cell proliferation rate was 71% and 73% at the diluted 10 times and 100 times fusion protein,respectively.The findings indicate that the recombinant IL15 fusion protein has the ability to promote the proliferation of CTLL-2 cells in vitro.
Key words:  Takifugu rubripes    interleukin-15    prokaryotic expression    biological activity evaluation
               出版日期:  2015-12-21      发布日期:  2016-12-30      期的出版日期:  2015-12-21
中图分类号:  S965.225  
引用本文:    
孙赛红, 马普, 李慧, 孙鹤, 孔德荣, 李凤华, 仇雪梅, 姜志强, 刘海映. 红鳍东方鲀白介素15的原核表达及其活性测定[J]. 大连海洋大学学报, 2015, 30(6): 598-603.
SUN Sai-hong, MA Pu, LI Hui, SUN He, KONG De-rong, LI Feng-hua, QIU Xue-mei, JIANG Zhi-qiang, LIU Hai-ying, LIU Sheng-chong, WANG Xiu-li. Prokaryotic expression and biological activity evaluation of recombinan IL15 from tiger pufferfish Takifugu rubripes. Journal of Dalian Ocean University, 2015, 30(6): 598-603.
链接本文:  
https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/10.16535/j.cnki.dlhyxb.2015.06.005  或          https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/Y2015/V30/I6/598
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