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大连海洋大学学报  2017, Vol. 32 Issue (1): 56-61    DOI: 10.16535/j.cnki.dlhyxb.2017.01.010
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虹鳟传染性胰脏坏死病毒的分离鉴定及聚类分析
刘淼,徐黎明,赵景壮,曹永生,刘红柏,尹家胜,卢彤岩
中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070
Isolation,identification and cluster analysis of an infectious pancreatic necrosis virus
LIU Miao,XU Li-ming,ZHAO Jing-zhuang,CAO Yong-sheng, LIU Hong-bai,YIN Jia-sheng,LU Tong-yan
Heilongjiang River Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Harbin 150070,China
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摘要 为研究传染性胰脏坏死病毒 (IPNV)感染虹鳟Oncorhynchus mykiss的病理特性,取云南省某养殖场大规模死亡的虹鳟稚鱼进行了病原的分离与鉴定,试验中利用鲑鳟鱼常见病毒敏感细胞大鳞大麻哈鱼胚胎细胞 (Chinook salmon embryo cells,CHSE-214)、鲤上皮瘤细胞 (Epitheliaoma papulosum cyprinid,EPC)和虹鳟性腺细胞 (Rainbow trout gonad cell line,RTG-2)对虹鳟稚鱼无菌组织悬液进行病毒培养,并对产生细胞病变的上清进行病毒RNA提取及鲑鳟鱼常见病毒的RT-PCR检测,利用敏感细胞进行病毒分离株的噬斑培养及滴度测定,并对病毒形态进行透射电镜观察。结果表明:细胞培养显示,该组织悬液能使CHSE-214和RTG-2细胞产生明显的细胞病变;RT-PCR结果显示,检测样本呈IPNV阳性,传染性造血器官坏死病毒(IHNV)呈阴性;该IPNV分离株(命名为ChRtm213)在CHSE-214、RTG-2和EPC细胞上的病毒滴度分别为105.2、103.2、102.3TCID50/mL,在CHSE-214细胞上培养4 d即可形成肉眼可见的病毒噬斑;在透射电镜下清晰可见大量病毒粒子呈晶格状排列于细胞质内;ChRtm213分离株与西班牙毒株2310 (AY489225)VP2相似度较高,核苷酸序列一致性为96.4%;聚类分析结果显示,ChRtm213分离株与参考毒株加拿大Jasper(ATCC:VR-1325)聚为一簇,属于Gengroup 5基因型。研究表明,ChRtm213分离株异于已报道的IPNV分离株,具有不同的血清型及病毒毒力,可为传染性胰脏坏死病毒的检测及防控提供参考。
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刘淼
徐黎明
赵景壮
曹永生
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尹家胜
卢彤岩
关键词:  虹鳟  传染性胰脏坏死病毒 (IPNV)  CHSE-214  基因型    
Abstract: A pathogen of an infectious pancreatic necrosis(IPN)was isolated and cultured in rainbow trout Oncorhynchus mykiss collected from Yunnan Province by chinook salmon embryo cells(CHSE-214),epitheliaoma papulosum cyprinid(EPC)and rainbow trout gonad cell line(RTG-2)inoculated with sterile tissue suspension. The RNA was extracted from cells with cytopathic effect,and identified by RT-PCR assays used for common salmon virus detection.The isolate was further analyzed with plaque assay,virus titer detection,and electron microscopy observation.The cell culture showed that the tissue suspension led to produce typical cytopathic effect(CPE) on CHSE-214 and RTG-2 instead of EPC.The RT-PCR showed that the sample was positive to infectious pancreatic necrosis virus(IPNV)and negative to infectious hematopoietic necrosis virus(IHNV).The IPNV isolate was named as ChRtm213,with titer of 105.2TCID50/mL on CHSE-214,103.2TCID50/mL on RTG-2 and 102.3TCID50/mL on EPC.ChRtm213 produced plagues in CHSE-214,and plenty of virons in crystalline arrangement was observed in cytoplasm.The ChRtm213 had the maximal homology with Spain IPNV-2310 isolate,with nucleotide identity of 96.4%.The cluster analysis revealed that ChRtm213,in the same cluster with reference strain Canada isolate Jasper(ATCC:VR-1325),belonged to Gengroup 5.A novel IPNV was isolated and identified from Yunnan Province,and the findings provide reference for the monitoring and vaccine development of IPNV in China.
Key words:  Oncorhynchus mykiss    infectious pancreatic necrosis virus    CHSE-214    gene type
               出版日期:  2017-02-21      发布日期:  2022-08-23      期的出版日期:  2017-02-21
中图分类号: 

Q785

 
  S917  
基金资助: 黑龙江省应用技术研究与开发计划项目 (GA13B401);黑龙江省自然科学基金资助项目 (C201462);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 (HSY201514)
引用本文:    
刘淼, 徐黎明, 赵景壮, 曹永生, 刘红柏, 尹家胜, 卢彤岩. 虹鳟传染性胰脏坏死病毒的分离鉴定及聚类分析[J]. 大连海洋大学学报, 2017, 32(1): 56-61.
LIU Miao, XU Li-ming, ZHAO Jing-zhuang, CAO Yong-sheng, LIU Hong-bai, YIN Jia-sheng, LU Tong-yan. Isolation,identification and cluster analysis of an infectious pancreatic necrosis virus. Journal of Dalian Ocean University, 2017, 32(1): 56-61.
链接本文:  
https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/10.16535/j.cnki.dlhyxb.2017.01.010  或          https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/Y2017/V32/I1/56
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