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大连海洋大学学报  2023, Vol. 38 Issue (6): 947-955    DOI: 10.16535/j.cnki.dlhyxb.2023-111
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皱纹盘鲍肽聚糖识别蛋白的表达及免疫功能特性
乔琨,郑春花,陈贝,苏永昌,郝华,许旻,蔡水淋,刘智禹*
1.福建省水产研究所 福建省海洋生物增养殖与高值化利用重点实验室,福建 厦门 361013;2.集美大学 海洋食品与生物工程学院,福建 厦门 361021;3.厦门大学 海洋与地球学院,福建 厦门 361102
Expression and immune function characteristics of peptidoglycan recognition protein gene in disk abalone (Haliotis discus hannai)
QIAO Kun,ZHENG Chunhua,CHEN Bei,SU Yongchang,HAO Hua,XU Min,CAI Shuilin,LIU Zhiyu*
1.Key Laboratory of Cultivation and High-Value Utilization of Marine Organisms in Fujian Province,Fisheries Research Institute of Fujian,Xiamen 361013,China;2.College of Ocean Food and Biological Engineering,Jimei University,Xiamen 361021,China;3.College of Ocean and Earth Sciences,Xiamen University,Xiamen 361102,China
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摘要 为研究皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)肽聚糖识别蛋白HdhPGRP-SC2-like的免疫功能特性,利用RACE技术克隆了HdhPGRP-SC2-like基因的全长cDNA序列,采用实时荧光定量PCR(qPCR)分析了HdhPGRP-SC2-like基因的组织分布特征,通过原核表达获得了重组蛋白rHdhPGRP-SC2-like,并对其酰胺酶活性及免疫特性进行了验证。结果表明:HdhPGRP-SC2-like基因的cDNA全长为938 bp,开放阅读框为780 bp,编码260个氨基酸,包含保守的PGRP结构域和Ami_2结构域;HdhPGRP-SC2-like属于短型PGRP,与软体动物近缘物种PGRP具有高度相似性;qPCR分析显示,HdhPGRP-SC2-like mRNA在皱纹盘鲍各组织中均有表达,其中,鳃中表达量最高,外套膜、消化腺中表达量次之,腹足和血细胞中表达量较低;进一步构建原核表达载体pET-28a(+)-HdhPGRP-SC2-like,经诱导表达、分离纯化获得重组蛋白rHdhPGRP-SC2-like,该蛋白具有肽聚糖结合活性,且在Zn2+存在的情况下显示出酰胺酶活性。研究表明,HdhPGRP-SC2-like能够结合细菌肽聚糖成分,在机体抵御入侵细菌等免疫防御中发挥重要作用。
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乔琨
郑春花
陈贝
苏永昌
郝华
许旻
蔡水淋
刘智禹
关键词:  皱纹盘鲍  肽聚糖识别蛋白  酰胺酶活性  免疫防御  细菌结合    
Abstract: In order to investigate the immune function of the peptidoglycan recognition protein HdhPGRP-SC2-like gene in disk abalone (Haliotis discus hannai), the full-length cDNA sequence of HdhPGRP-SC2-like gene was cloned by RACE technology, and tissue distribution of HdhPGRP-SC2-like gene was analyzed in the disk abalone by real-time fluorescent quantitative PCR(qPCR). The recombinant protein rHdhPGRP-SC2-like was obtained by prokaryotic expression, and its amidase activity and immune characteristics were verified. The results showed that the cDNA of the HdhPGRP-SC2-like gene was 938 bp in length, with an open reading frame of 780 bp, encoding 260 amino acids and containing the conserved PGRP and Ami_2 structural domains. HdhPGRP-SC2-like gene as a short type PGRP had high similarity with the closely related species PGRP of mollusks. qPCR analysis showed that HdhPGRP-SC2-like mRNA was expressed in all tissues of the disk abalone, with the maximal expression level in gill, a certain amount of expression level in mantle and digestive gland, and the minimal content in foot and hemocyte. The prokaryotic expression vector pET-28a(+)-HdhPGRP-SC2-like was further constructed, and the recombinant protein rHdhPGRP-SC2-like gene was obtained by induction of expression, isolation, and purification. The recombinant protein had peptidoglycan binding activity and showed amidase activity in the presence of Zn2+. The finding indicated that HdhPGRP-SC2-like gene binded bacterial peptidoglycan components and played an important role in the immune defence against invading bacteria.
Key words:  Haliotis discus hannai    peptidoglycan recognition protein    amidase activity    immune defence    bacterial binding
               出版日期:  2024-01-18      发布日期:  2024-01-18      期的出版日期:  2024-01-18
中图分类号:  S 917.4  
基金资助: 厦门市青年创新基金(3502Z20206002);福建省种业创新与产业化工程项目(2021FJSCZY02);福建省促进海洋与渔业产业高质量发展专项资金项目(FJHYF-L-2023-23);厦门市海洋与渔业发展专项资金资助项目(21CZP006HJ04)
引用本文:    
乔琨, 郑春花, 陈贝, 苏永昌, 郝华, 许旻, 蔡水淋, 刘智禹. 皱纹盘鲍肽聚糖识别蛋白的表达及免疫功能特性[J]. 大连海洋大学学报, 2023, 38(6): 947-955.
QIAO Kun, ZHENG Chunhua, CHEN Bei, SU Yongchang, HAO Hua, XU Min, CAI Shuilin, LIU Zhiyu. Expression and immune function characteristics of peptidoglycan recognition protein gene in disk abalone (Haliotis discus hannai). Journal of Dalian Ocean University, 2023, 38(6): 947-955.
链接本文:  
https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/10.16535/j.cnki.dlhyxb.2023-111  或          https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/Y2023/V38/I6/947
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