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大连海洋大学学报  2009, Vol. 24 Issue (1): 24-29    DOI: 10.3969/j.issn.1000-9957.2009.01.005
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产κ-卡拉胶酶菌株的筛选及其发酵条件的优化
李俊,马悦欣,冯兵,于杨
大连水产学院农业部海洋水产增养殖学重点开放实验室
Screening and optimization a K -- carrageenase of fermentation conditions by producing bacterium
LI Jun, MA Yue-xin, FENG Bing, YU Yang
Key Laboratory of Mariculture, Agriculture Ministry, PRC, Dalian Fisheries University, Dalian 116023, China
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摘要 对K-卡拉胶酶产生菌进行富集培养,以K-卡拉胶为唯一碳源的平板初筛,从多种海藻上分离纯化获得32株具有卡拉胶酶活性的菌株,经摇瓶复筛,从亮管藻上分离的HC4菌株酶活力最高,为50.75U/mL。测定了HC4菌株的16SrRNA基因序列1436bp,在核苷酸序列数据库(NCBI)中进行同源性检索,发现它与Tatrtlana agarivorans的相似性为98%。通过单因子筛选和正交试验,确定该菌株产酶的最佳培养基组成为:碳源K-卡拉胶5g/L;氮源蛋白胨3g/L和NaNO3 1g/L;元机盐NaCl20g/L、K2HPO4·3H2O1g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L和CaCl20.1g/L。最佳培养条件为:摇床转速150r/min,250mL三角瓶中发酵培养基的装液量50mL,接种量4%,发酵培养基起始pH7.5,温度28℃,培养时间28h。经培养基组成及培养条件优化后,HC4菌株的K-卡拉胶酶酶活力提高到602.30U/mL,是优化前的11.87倍。
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李俊
马悦欣
冯兵
于杨
关键词:  卡拉胶酶产生菌  筛选  发酵条件  优化    
Abstract: The screening of a K - carrageenase producing bacterium and optimization of fermentation conditions to yield a higher production of extracellular enzyme were conducted by enrichment culture technique and first - screen- ing by K- carrageenan plate containing K- carrageenan as sole source of carbon and energy. A total of 32 isolates that actively degraded K - carrageenan were screened from various seaweeds. Strain HC4 isolated from Hyalosiphonia caespitosa showed the maximum activity by second - screening of shaking culture. Fragment of 1436 bp sequence of strains HC4 16S rRNA gene was amplified, which showed 98% similarity to Tamlana agarivorans when analyzed at National Center for Biotechnology Information (NCBI) database. The culture conditions for the strain HC4 were standardized for the maximal productivity of the extracellular K - carrageenase. The optimal medium components determined by single factor test and orthogonal test were found as the following: K -carrageenan 5 g/L, peptone 3 g/L, NANO3 1 g/L, NaCl 20 g/L, K2HPO4 -3H2O 1 g/L, MgSO4 .7H2O 0.5 g/L, and CaCl2 0.1 g/L. The optimal culture condition were observed as the following: shaking speed 150 r/min, 50 mL medium in 250 mL Erlenmeyer flask, inoculum volume 4%, initial medium pH 7.5, incubation temperature 28 ℃ and incubation time 28 h. In the optimal conditions, the K - carrageenase activity was found to increase by 10. 87 folds compared with the unoptimized conditions.
Key words:  κ-carrageenase production bacterium    screening    fermentation condition    optimization
               出版日期:  2009-02-21      发布日期:  2016-12-30      期的出版日期:  2009-02-21
中图分类号:  Q939.9  
引用本文:    
李俊, 马悦欣, 冯兵, 于杨. 产κ-卡拉胶酶菌株的筛选及其发酵条件的优化[J]. 大连海洋大学学报, 2009, 24(1): 24-29.
LI Jun, MA Yue-xin, FENG Bing, YU Yang. Screening and optimization a K -- carrageenase of fermentation conditions by producing bacterium. Journal of Dalian Ocean University, 2009, 24(1): 24-29.
链接本文:  
https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/10.3969/j.issn.1000-9957.2009.01.005  或          https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/Y2009/V24/I1/24
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