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大连海洋大学学报  2014, Vol. 29 Issue (6): 561-565    DOI: 10.3969/J.ISSN.2095-1388.2014.06.004
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红尾皇冠鱼无乳链球菌病LAMP检测方法的建立与应用
姚学良,徐晓丽,李贺密,包海岩,任涵玮,郑艳坤
天津市水产技术推广站,天津 300221
Developmentandapplicationofloop-mediatedisothermalamplificationfordetectionofStreptococcusagalactiaeingreenterrorAequidensrivulatus
YAO Xue-liang, XU Xiao-li, LI He-mi, BAO Hai-yan, REN Han-wei, ZHENG Yan-kun
Tianjin Fishery Technical Extension Station, Tianjin 300221, China
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摘要 cfb基因保守序列的6个区域设计4条特异性引物,利用链置换DNA聚合酶(BstDNA polymerase)在恒温(65 ℃)下保温40 min,建立了无乳链球菌Streptococcusagalactiae的LAMP技术。建立的LAMP方法能够特异性地检测无乳链球菌,检测灵敏度为3.7×101~3.7×102cfu/mL,反应前加入显色剂钙黄绿素避免二次污染。现场应用中采用FTA卡采集红尾皇冠鱼Aequidensrivulatus病鱼肝脏组织病原菌,操作简便、快捷。研究表明,针对无乳链球菌cfb基因建立的LAMP检测方法具有较高的特异性及稳定性,尤其是具有快速、简便、成本低等优点,可用于无乳链球菌的野外现场快速检测。
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姚学良
徐晓丽
李贺密
包海岩
任涵玮
郑艳坤
关键词:  红尾皇冠鱼  无乳链球菌  cfb基因  环介导等温扩增技术(LAMP)    
Abstract: Thecfbgene ofStreptococcusagalactiaewas amplified by a set of four specific primers that recognize six distinct sequences of the target in 40 min by incubating all of the reagents in a single tube with BstDNA polymerase at a constant 65 ℃. A loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay was developed and validated for the specific detection ofStreptococcusagalactiae, with detection limits of 3.7×101-3.7×102cfu/mL. The resulting amplicons were visualized by adding calcein to the reaction tube before the reaction. FTA cards was used for collection and purification of nucleic acids from a liver of green terrorAequidensrivulatuswith pathogenic bacteria in field applications. The findings demonstrate that the LAMP-based assay is a sensitive and reliable means for the detection ofStreptococcusagalactiaewith rapidity, simplicity and low cost, especially suitable for on-site rapid diagnosis.
Key words:  Aequidensrivulatus    Streptococcusagalactiae    cfbgene    loop-mediated isothermal amplification (LAMP)
                    发布日期:  2016-12-30      期的出版日期:  2014-12-21
中图分类号:  S941.42  
引用本文:    
姚学良, 徐晓丽, 李贺密, 包海岩, 任涵玮, 郑艳坤. 红尾皇冠鱼无乳链球菌病LAMP检测方法的建立与应用[J]. 大连海洋大学学报, 2014, 29(6): 561-565.
YAO Xue-liang, XU Xiao-li, LI He-mi, BAO Hai-yan, REN Han-wei, ZHENG Yan-kun. Developmentandapplicationofloop-mediatedisothermalamplificationfordetectionofStreptococcusagalactiaeingreenterrorAequidensrivulatus. Journal of Dalian Ocean University, 2014, 29(6): 561-565.
链接本文:  
https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/10.3969/J.ISSN.2095-1388.2014.06.004  或          https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/Y2014/V29/I6/561
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