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大连海洋大学学报  2022, Vol. 37 Issue (4): 558-567    DOI: 10.16535/j.cnki.dlhyxb.2021-254
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一株大菱鲆源杀鲑气单胞菌非典型株的分离鉴定及毒力基因型
一株大菱鲆源杀鲑气单胞菌非典型株的分离鉴定及毒力基因型
1.烟台市海洋经济研究院,山东 烟台 264006;2.烟台宗哲海洋科技有限公司,山东 烟台 264006;3.山东省渔业发展和资源养护总站,山东 烟台 264003
Isolation,identification and virulence gene of atypical Aeromonas salmonicida from cultured turbot Scophthalmus maximus
WANG He, WANG Wenhao, HUANG Hua, LIU Xiaodan, ZHANG Liwen,YANG Tao, HU Lebin, LI Zhanjun*
1.Yantai Marine Economic Research Institute, Yantai 264006, China; 2.Yantai Zongzhe Marine Technology Company Limited, Yantai 264006, China; 3.Shandong Hydrobios Resources Conservation and Management Center, Yantai 264003, China
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摘要 为研究大菱鲆Scophthalmus maximus杀鲑气单胞菌非典型株的特性,利用常规病原菌分离方法,从某养殖场患病个体脾脏分离纯化获得一株优势菌BHAS-1,通过生理生化鉴定、序列比对、回归感染、毒力基因检测和药敏试验等对其开展研究。结果表明:分离株BHAS-1为无运动能力、β溶血的革兰氏阴性杆菌,与杀鲑气单胞菌非典型株具有相似的生理生化特性,但该分离株不产生吲哚,不能利用甘露糖;对菌株开展16S rRNA、gyrBvapA基因扩增和序列比对,基于vapA基因构建的系统进化关系中,分离株BHAS-1与Aeromonas salmonicida subsp.masoucida RZ6S-1及ATCC 27013T单独聚为一支,结合生理生化鉴定结果,判定分离株为杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种A.salmonicida subsp.masoucida;菌株BHAS-1对大菱鲆的半致死浓度(LD50)为1.62×108 CFU/mL,毒力基因型为aer+-zot+-dna+-ser+-lip+-sp+-alt+-act+-ast+-epa+-fla+-ahyB+;菌株BHAS-1对恩诺沙星、四环素等7类13种抗生素敏感,对复方新诺明、氯霉素等6类7种抗生素耐药,耐药率为31.82%。研究表明,应用vapA基因可以有效鉴别杀鲑气单胞菌不同亚种。
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王鹤
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关键词:  大菱鲆  杀鲑气单胞菌非典型株  杀日本鲑亚种  分离鉴定  毒力基因    
Abstract:  In order to study the characteristics of atypical Aeromonas salmonicida, a dominant strain BHAS-1 was isolated and purified from the spleen of diseasing turbot individuals using conventional methods. The isolated strain BHAS-1 was identified by morphological observation, physiological and biochemical tests, and PCR specific amplification. The virulence gene and antibiotic sensitivity were also detected. The results showed that BHAS-1 strain was gram-negative cocci with β-hemolytic and no motility. The isolated stain BHAS-1 had similar physiological and biochemical properties to the atypical A.salmonicida, but the strain did not produce indole and cannot utilize mannose. After 16S rRNA, gyrB and vapA sequence alignment analysis, BHAS-1 was identified as A.salmonicida subsp. masoucida, and the virulence genotype was aer+-zot+-dna+-ser+-lip+-sp+-alt+-act+-ast+-epa+-fla+-ahyB+, with LD50 of 1.62×108 CFU/mL. The strain BHAS-1 was sensitive to 13 kinds of antibiotics such as enrofloxacin and tetracycline, resistant to 7 kinds of antibiotics such as puromyn and chloramphenicol, and moderately sensitive to ampicillin and streptomycin, with average resistance rate of 31.82%. In this study, we first reported the infection of A.salmonicida subsp. masoucida to cultured turbot in China. The molecular characteristics and drug sensitivity of the strain BHAS-1 were studied to provide reference for the prevention of furunculosis caused by atypical A.salmonicida. The findings indicate that the application of vap gene can effectively identify different subspecies of A.salmonicida.
Key words:  Scophthalmus maximu    atypical Aeromonas salmonicida     A.salmonicida subsp.masoucida    identification    virulence gene
               出版日期:  2022-09-19      发布日期:  2022-09-19      期的出版日期:  2022-09-19
中图分类号:  S 941.42  
  Q 938.8  
基金资助: 烟台市重点研发计划项目(2019MSGY127);山东省鱼类产业技术体系(SDAIT-12-10)
引用本文:    
王鹤, 王文豪, 黄华, 刘晓丹, 张丽文, 杨涛, 胡乐彬, 李战军. 一株大菱鲆源杀鲑气单胞菌非典型株的分离鉴定及毒力基因型[J]. 大连海洋大学学报, 2022, 37(4): 558-567.
WANG He, WANG Wenhao, HUANG Hua, LIU Xiaodan, ZHANG Liwen, YANG Tao, HU Lebin, LI Zhanjun. Isolation,identification and virulence gene of atypical Aeromonas salmonicida from cultured turbot Scophthalmus maximus. Journal of Dalian Ocean University, 2022, 37(4): 558-567.
链接本文:  
https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/10.16535/j.cnki.dlhyxb.2021-254  或          https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/Y2022/V37/I4/558
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