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大连海洋大学学报  2023, Vol. 38 Issue (1): 59-67    DOI: 10.16535/j.cnki.dlhyxb.2022-056
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湛江地区患病对虾池塘中副溶血性弧菌的MLST分型和新型耐药毒株的分离鉴定
吴俊敏, 王艺, 郝婧薇, 王青瑶, 张晋, 傅松哲*, 刘鹰
1.设施渔业教育部重点实验室(大连海洋大学),辽宁 大连116023; 2.大连海洋大学 海洋科技与环境学院,辽宁 大连 116023; 3.大连海洋大学 水产与生命学院,辽宁 大连116023; 4.浙江大学 生物系统工程与食品科学学院,浙江 杭州 310058
MLST typing of Vibrio parahaemolyticus from diseased shrimp ponds in Zhanjiang area and isolation and identification of novel drug-resistant strains
WU Junmin, WANG Yi, HAO Jingwei, WANG Qingyao, ZHANG Jin, FU Songzhe*, LIU Ying
1.Key Laboratory of Environment Controlled Aquaculture(Dalian Ocean University), Ministry of Education, Dalian 116023,China; 2.College of Marine Science and Environment, Dalian Ocean University, Dalian 116023,China; 3.College of Fisheries and Life Science, Dalian Ocean University, Dalian 116023,China; 4.College of Biosystems Engineering and Food Science, Zhejiang University, Hangzhou 310058, China
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摘要 为研究湛江地区患病对虾养殖池塘中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的遗传多样性,选择副溶血性弧菌的7个管家基因对分离菌株进行MLST分型,采用PCR法检测tdhtrhtlhmam7、vcrD1、vcrD2和pirAB毒力基因的携带情况,用纸片扩散法对所有菌株进行药敏试验,选择其中1株多重耐药菌株进行全基因组测序,并通过IslandPath-DIOMB分析其耐药基因岛来源。结果表明:从患病的对虾池塘水样中共分离出58株副溶血性弧菌,通过MLST分型共分为34个ST型;58株菌株均携带毒力基因tlhmam7和vcrD1,未发现tdhtrhvcrD2基因存在,其中,8株菌株携带引起急性肝胰腺坏死病(AHPND)的毒力基因pirAB;药敏试验显示,58株菌株对青霉素耐药率均为100%,对氨苄西林、克拉霉素和庆大霉素的耐药率较高,其中ST1740型的4株菌株均为多重耐药,从中选择ZJ20-3/2020菌株进行全基因组测序,发现该菌株含有8个耐药基因,分别为blaCARB-41aadA16、aph(6)-Idaph(3″)-Ibtet(A)、sul1、dfrA27和ARR-3,并对青霉素、卡那霉素、四环素和利福平耐药;用IslandPath-DIOMB分析发现,ZJ20-3/2020菌株存在4个基因岛。研究表明,湛江地区患病对虾养殖池塘中的副溶血性弧菌具有丰富的遗传多样性,发现了一个携带pirAB的新ST型(ST1740)菌株,其携带4种来自希瓦氏菌的基因岛且为多重耐药菌株,本研究首次在副溶血性弧菌中发现来自希瓦氏菌属的基因水平转移,这些结果为防治急性肝胰腺坏死病提供了科学依据。
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吴俊敏
王艺
郝婧薇
王青瑶
张晋
傅松哲
刘鹰
关键词:  副溶血性弧菌  凡纳滨对虾  药敏试验  多位点序列分型    
Abstract: In order to evaluate the genetic diversity of Vibrio parahaemolyticus in shrimp ponds in Zhanjiang area, seven housekeeping genes dnaEgyrBrecAdtdSpntApyrC and tnaA of pathogenic V. parahaemolyticus were selected in the experiment, and the isolated strains were subjected to MLST typing for genetic evolution analysis by MEGA 6.0 software.Also, the virulence genes of tdhtrhtlhmam7, vcrD1, vcrD2 and pirAB were detected by a PCR method. The drug susceptibility test was carried out on all strains by disc diffusion method, and one multi-drug resistant strain was selected using the Illumina Hiseq 2500 platform. Subsequently, the spliced sequences were detected by IslandPath-DIOMB software to analyze the origin of drug resistance gene islands. The 58 strains of V.parahaemolyticus were divided into 34 ST types by MLST, all of which contained virulence genes tlhmam7 and vcrD1, without tdhtrh and vcrD2, 8 strains containing the virulence gene pirAB causing AHPND. It was found that the 58 strains were 100% resistant to penicillin and high resistance rates to ampicillin, clarithromycin and gentamicin. Four strains of ST1740 were found to be multi-drug resistant. One of the 4 ST1740 strains (ZJ20-3/2020) was selected for whole genome sequencing, and contained 8 drug resistance genes, namely blaCARB-41aadA16, aph(6)-Idaph(3″)-Ibtet(A), sul1, dfrA27 and ARR-3, and were resistant to penicillin, kanamycin, tetracycline and rifampicin. Four gene islands were found in ST1740 strain by IslandPath-DIOMB software, with 99% DNA sequence similarity with the corresponding sequences in Shewanella NCTC12093, indicating that the V.parahaemolyticus in the shrimp culture area in Zhanjiang area had rich genetic diversity. MLST typing identified 2 new pirA-containing genotypes, and subsequent genomic analysis identified a novel drug-resistant strain. A new ST strain (ST1740) carrying pirAB was identified, which carried 4 gene islands from Shiwanella and were multidrug-resistant strains. The horizontal gene transfer from Shewanella in V.parahaemolyticus was the first reported and the findings provided important information for understanding of the population dynamics and pathogenic characteristics of V.parahaemolyticus in shrimp ponds in Zhanjiang area, and also provided a basis for the prevention and control of AHPND outbreaks.
Key words:  Vibrio parahaemolyticus     Penaeus vannamei    drug susceptibility test    multilocus sequence typing
               出版日期:  2023-03-02      发布日期:  2023-03-02      期的出版日期:  2023-03-02
中图分类号:  S 917.1  
  Q 93.3  
基金资助: 国家重点研发计划“蓝色粮仓科技创新”项目(2019YFD0900503);国家自然科学基金(81903372);辽宁省教育厅科研项目(QL202005)
引用本文:    
吴俊敏, 王艺, 郝婧薇, 王青瑶, 张晋, 傅松哲, 刘鹰. 湛江地区患病对虾池塘中副溶血性弧菌的MLST分型和新型耐药毒株的分离鉴定[J]. 大连海洋大学学报, 2023, 38(1): 59-67.
WU Junmin, WANG Yi, HAO Jingwei, WANG Qingyao, ZHANG Jin, FU Songzhe, LIU Ying. MLST typing of Vibrio parahaemolyticus from diseased shrimp ponds in Zhanjiang area and isolation and identification of novel drug-resistant strains. Journal of Dalian Ocean University, 2023, 38(1): 59-67.
链接本文:  
https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/10.16535/j.cnki.dlhyxb.2022-056  或          https://xuebao.dlou.edu.cn/CN/Y2023/V38/I1/59
[1] 朱昱铮, 申亮, 郭冉, 荆冰妍, 梁倍宁, 高佳朋. 鱼肽和蛋白酶替代部分鱼粉对凡纳滨对虾生长、消化酶及肠道菌群的影响[J]. 大连海洋大学学报, 2022, 37(5): 756-763.
[2] 曲秦坤, 刘俊荣, 赵前, 周进, 田元勇, 徐昙烨. 基于品质易逝期的模拟中转基地处置对凡纳滨对虾活品和锁鲜品贮藏稳定性的影响[J]. 大连海洋大学学报, 2022, 37(1): 148-156.
[3] 戚瑞荣, 唐绍林, 张吉鹏, 崔龙波, 马家好. 凡纳滨对虾气泡病的组织病理学观察[J]. 大连海洋大学学报, 2021, 36(6): 952-958.
[4] 赵锡蝶, 郑海玲, 刘明明, 汤雨, 乔秀亭, 刘群, 黄宗海, 程镇燕. 豆粕替代鱼粉并添加有机酸对凡纳滨对虾生长、免疫和肠道菌群的影响[J]. 大连海洋大学学报, 2021, 36(6): 966-975.
[5] 喻大鹏, 唐怀庆, 丘金珠, 宋海霞, 梁富, 夏洪丽, 宋长江, 鲁义善. 乌鳢烂身病病原的分离鉴定及病理组织观察[J]. 大连海洋大学学报, 2021, 36(5): 745-751.
[6] 王鹤, 李战军, 黄华, 徐晓莹, 贺加贝, 曹亚男, 赵强. 大菱鲆源副乳房链球菌的分离鉴定及其毒力基因型[J]. 大连海洋大学学报, 2021, 36(4): 563-572.
[7] 李春艳, 白晓慧, 刘义, 张振国, 张丽, 刘克明, 郝爽, 罗璋, 尤宏争. 致病性副溶血弧菌VP0630株的分离鉴定及其对凡纳滨对虾免疫酶活力的影响[J]. 大连海洋大学学报, 2020, 35(4): 502-508.
[8] 白杰, 周美红, 胡秀彩, 吕爱军, 叶明皓, 孙敬锋. 龟源弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定及药敏特性研究[J]. 大连海洋大学学报, 2019, 34(6): 798-803.
[9] 王巧煌. 福建红罗非鱼源无乳链球菌的分离鉴定及其分子特征[J]. 大连海洋大学学报, 2019, 34(1): 63-69.
[10] 叶明皓, 胡秀彩, 吕爱军, 孙敬锋, 刘小雪, 宋亚娇. 巴西龟眼炎病原菌的分离鉴定及组织病理学研究[J]. 大连海洋大学学报, 2018, 33(5): 564-569.
[11] 杨品贤, 贾高旺, 夏辉, 齐国山, 李雪鹤, 路晶晶, 张宇, 郭冉. 投喂频率和糖源组成对凡纳滨对虾糖代谢的影响[J]. 大连海洋大学学报, 2018, 33(5): 583-588.
[12] 陆梦莹, 胡秀彩, 吕爱军, 孙敬锋, 陈成勋, 王晓梅, YEONG Yiksung, 宋亚娇. 鲶源维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏特性[J]. 大连海洋大学学报, 2017, 32(5): 563-567.
[13] 王博雅, 王力, 刘美如, 叶仕根, 黎睿君, 李华, 李强. 凡纳滨对虾3种主要病毒和虾肝肠胞虫在辽宁地区的流行情况分析[J]. 大连海洋大学学报, 2017, 32(2): 150-154.
[14] 高欣, 景泓杰, 赵文, 孟凡明, 郭长江, 刘青. 凡纳滨对虾高位养殖池塘浮游生物群落结构及水质特征[J]. 大连海洋大学学报, 2017, 32(1): 44-50.
[15] 姚洪, 张吉鹏, 杨川, 张利娟, 朴元植, 刘月芬, 叶仕根, 李华. 辽宁一例凡纳滨对虾大规模死亡的病原研究[J]. 大连海洋大学学报, 2016, 31(3): 256-260.
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