中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis，以下简称“河蟹”)是中国重要的经济养殖蟹类之一，因其营养丰富和口味独特深受消费者的喜爱[1]。20世纪80年代初河蟹人工育苗技术取得突破以来，国家大力推广河蟹养殖，其产量逐年上升，据统计，2023年全国河蟹总产量高达88.8万t[2]。近年来，因水产养殖规划调整及环境承载力下降等原因，河蟹养殖面积有所缩小，为了满足市场需求，养殖户不得不通过提高苗种投放密度来维持河蟹产量[3]。这种高密度养殖不仅增加了水体负荷，还加剧了水质恶化，形成了有利于病原微生物滋生的环境，河蟹病害的发生愈发频繁和严重[4]。此外，为提高河蟹生长速度并缩短养殖周期，不少养殖户在养殖后期大量使用冰鲜鱼作为育肥饵料，然而，冰鲜鱼虽富含营养却来源复杂且易腐败，尤其在高温季节易滋生细菌，若处理不当将污染水体并恶化养殖环境，同时增加河蟹感染疾病的风险[5]。据报道，河蟹常见的疾病主要包括烂鳃病、颤抖病、纤毛虫病和肝胰腺白肝症等，这些疾病传播快、致死率高且尚无特效治愈手段，主要依赖改善水质、减少饲料污染和合理用药进行控制，对养殖生产造成了极大影响[6-7]。
肝胰腺是甲壳动物最为重要的内脏器官之一，兼具营养物质的消化、吸收、转化及储存功能，其健康状况与甲壳动物的生长发育、免疫能力及商品品质密切相关[8]。在河蟹养殖过程中，肝胰腺极易受到外部环境因子影响，一旦环境胁迫加剧，便容易引发肝胰腺组织结构破坏。洪美玲等[9]研究表明，水体中高浓度氨氮可导致河蟹肝小管基膜破裂、细胞结构模糊及少量细胞核解体，Wang等[10]研究表明，水体高pH慢性胁迫易导致河蟹肝小管上皮组织紊乱及基膜与上皮组织分离。此外，水质持续恶化、温度剧变或污染物残留超标易导致河蟹肝胰腺功能障碍，甚至导致组织变性坏死，即肝胰腺坏死综合征，俗称“白肝症”[11-12]。本课题组在对多个河蟹养殖池塘的长期跟踪观察中，发现部分河蟹虽然在外观上无明显异常，但壳硬度低、活力差，解剖后发现肝胰腺呈浅黄色或灰白色、肝胰腺指数和肌肉丰满度低，并且发现河蟹部分肝胰腺发生明显硬化的特征。该性状可能是特定环境压力长期作用所导致的一种慢性肝损伤结果，但这一表型在以往文献中尚未有明确报道。鉴于此，本研究拟通过比较肝硬化河蟹和正常河蟹肝胰腺的外观、组织学和营养成分差异，开展对河蟹肝硬化性状的系统研究，以期为肝硬化河蟹的生物学特性和后期营养调控提供新的见解和依据。
1 材料与方法
1.1 材料
肝硬化河蟹于2024年9月—10月采集自江苏省兴化市河蟹养殖池塘，并从同一池塘中挑选生命力强、肝胰腺呈黄色或橙色的健康个体作为对照组，肝硬化河蟹和对照组河蟹分别采集5只。由于肝小管硬化症状仅在雌蟹中发现，因此本研究中均以雌蟹作为研究对象(图1)。样品采集前对试验蟹进行称重，肝硬化河蟹和对照组河蟹平均体质量分别为(185.44±13.80)g和(179.65±15.42)g，随后解剖取出肝胰腺并准确称重，用于计算肝胰腺指数(HSI)，剩余样品-20 ℃保存，用于常规生化、脂肪酸和氨基酸组成测定。HSI计算公式为
(1)
图1 肝硬化与对照组河蟹肝胰腺外观
Fig.1 Difference in hepatopancreas appearance between cirrhotic and control crab
1.2 方法
1.2.1 组织学及细胞学观察 从每只河蟹的相同部位取出适量肝胰腺组织，立即置于Bouin’s固定液中固定24 h，随后转入70%乙醇中保存。组织样本经梯度乙醇(70%、80%、90%、95%、100%)脱水处理后，使用二甲苯进行透明化处理，并进行石蜡包埋。采用组织切片机(KD-3000，Leica)制备连续切片，切片厚度为5～7 μm。石蜡切片经常规脱蜡、复水后，进行苏木精-伊红染色(HE)。染色完成后使用尼康显微镜(Nikon，Japan)进行观察和图像采集，利用图像分析软件Image-Pro Plus 6.0(Media Cybernetics，USA)测量肝胰腺上皮细胞的高度。从各试验组河蟹中分别取肝胰腺样本，参照Zilli等[13]的方法制备肝胰腺单细胞悬液。简要过程如下：组织经剪碎、胰蛋白酶消化处理后，过滤去除组织碎片，离心收集细胞，最终重悬于无菌生理盐水中。制备好的细胞悬液在显微镜下观察，并使用血球计数板对各类型细胞[包括R细胞(吸收细胞)、F细胞(纤维细胞)、B细胞(分泌细胞)和E细胞(胚细胞)]进行计数。每组计数3个视野，分别计算不同细胞类型在肝胰腺中所占比例，以评估细胞组成的差异情况。
1.2.2 常规生化和脂质组成测定 根据AOAC的方法对试验样品的水分、粗蛋白质和灰分含量进行测定[14]，按照Folch等[15]的方法用氯仿∶甲醇提取肝胰腺中粗脂肪并测定其含量。随后根据Wu等[16]方法，使用棒状薄层色谱-氢火焰离子分析仪(TLC-FID，Iatroscan MK-6s)测定肝胰腺的脂质组成，层析液体系为己烷/乙醚/甲酸(42/28/0.3，v/v/v)。
1.2.3 脂肪酸组成分析 采用14%三氟化硼-甲醇溶液对粗脂肪进行甲酯化[17]，经旋转蒸发浓缩后用于脂肪酸分析。分析仪器为Agilent 7890B-5977A气相色谱，配备Omegawax320毛细管柱(30.0 m×0.32 mm，USA)，进样口与氢火焰检测器温度设定为260 ℃。柱温程序从60 ℃起始，梯度升温至260 ℃，直至所有脂肪酸完全洗脱。载气氢气流速为30 mL/min，空气为300 mL/min，氮气补偿流速为25 mL/min，分流比为1∶50，系统压力为60 kPa。脂肪酸含量通过色谱峰面积百分比法计算。
1.2.4 氨基酸分析 样品采用酸水解法进行处理，以测定15种常规氨基酸[18]。称取约0.1 g冻干样品，在110 ℃下水解24 h。水解后的溶液以蒸馏水稀释并定容至50 mL，随后离心并过滤上清液。取1 mL滤液，在50 ℃条件下蒸干以去除盐酸，必要时重复操作；再加入2～5 mL 0.02 mol/L盐酸进行溶解，取1 μL溶液用于常规氨基酸的组成与含量分析。含硫氨基酸通过过氧甲酸预处理进行水解[19]；色氨酸则以5 mol/L NaOH水解样品后，经6 mol/L HCl中和处理[18]。常规及含硫氨基酸由氨基酸自动分析仪(S-433D，德国赛卡姆)进行定性定量分析，色氨酸采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法检测，其荧光检测器的激发波长为280 nm，发射波长为360 nm。
1.3 数据处理
试验数据均用平均值±标准差(mean±S.D.)表示，使用SPSS 19.0软件进行统计分析，用Levene法进行方差齐性检验，当数据不满足齐性方差时对百分比数据进行反正弦或者平方根处理，采用单因子ANOVA对试验结果进行方差分析，采用独立样本t检验方法检查两组各指标的差异性；当数据转换后仍不满足齐性方差时，采用Mann-Whiteny test进行非参数检验。显著性差异设为0.05。
2 结果与分析
2.1 肝胰腺组织学及细胞学观察
各组试验蟹肝胰腺组织学如图2所示，由于患病河蟹仅部分肝小管硬化，故本研究中分别对患病河蟹的硬化肝胰腺和未硬化肝胰腺进行组织学观察。相较于对照组个体(图2(c))，患病河蟹未硬化肝胰腺(图2(a))中肝小管上皮细胞与肝小管基膜发生分离，上皮细胞中B细胞消失，F细胞嗜碱性减弱，而R细胞细胞核嗜碱性增强，肝小管多角星形结构尚在。就患病河蟹硬化肝胰腺(图2(b))而言，肝小管管腔中出现致密物质且体积逐渐增加，导致肝小管直径增大，上皮细胞高度降低，直至多角星形结构消失，硬化物质完全充满整个肝小管。部分肝小管扭曲破裂，上皮细胞分界消失，由类似于E细胞的细胞代替，该细胞的细胞质无任何脂滴，细胞核发达，内细胞核呈强嗜碱性，密集分布于整个肝小管，肝小管基膜与上皮细胞完全分离。
图2 肝硬化组与对照组河蟹肝胰腺的组织学差异
Fig.2 Histological differences of hepatopancreas between cirrhotic and control crab
肝硬化组与对照组河蟹肝胰腺细胞组成及上皮细胞高度差异如图3所示。肝硬化组肝胰腺中R细胞、F细胞和B细胞比例均少于对照组，其中R细胞(19.25%)比例显著低于对照组(52.33%，P<0.05)。肝硬化个体肝胰腺中E细胞(49.63%)在所有细胞中比例最高，且显著高于对照组(8.35%，P<0.05)。就上皮细胞高度差异而言，肝硬化个体肝小管柱状上皮细胞厚度显著低于对照组(P<0.05)。
*表示显著性差异(P<0.05)。
*means highly significant differences (P<0.05).
图3 肝硬化组与对照组河蟹肝胰腺细胞组成及上皮细胞高度差异
Fig.3 Differences in percentage of hepatopancreas cell and height of hepatopancreas epithelial cell between cirrhotic and control crab
2.2 肝胰腺常规生化及脂类组成
肝硬化组和对照组河蟹肝胰腺冷冻干燥后外观见图4。各组肝胰腺在冷冻干燥后外观存在显著性差异，其中肝硬化组肝胰腺冷冻干燥后呈粉末状及灰黑色，无油脂且无明显气味，而对照组肝胰腺冷冻干燥后呈橘黄色，油脂含量丰富，互相黏结呈团块，不易散开，有特殊的油脂香气。
图4 肝硬化组与对照组河蟹肝胰腺冷冻干燥后外观
Fig.4 Appearance of freeze-drying hepatopancreas in cirrhotic and control crab
两组试验河蟹肝胰腺指数(HSI)、肝胰腺常规生化组成及脂质组成的差异情况见表1。结果显示，肝硬化组河蟹HSI为3.76%，显著低于对照组(6.67%，P<0.05)。此外，肝硬化组肝胰腺水分含量显著较高，达到69.92%(P<0.05)，而其粗蛋白质和粗脂肪含量则显著低于对照组(P<0.05)，其中肝硬化组肝胰腺的粗脂肪含量仅为14.76%，远低于对照组的31.23%(P<0.05)。在肝胰腺脂质组成方面，两组河蟹中甘油三酯(TG)含量均为最高，且甘油三酯、胆固醇酯(CE)和游离脂肪酸(FFA)含量在两组间无显著性差异，唯有磷脂(PL)含量在肝硬化组中显著较低(P<0.05)。
表1 肝硬化组与对照组河蟹肝胰腺指数、肝胰腺常规营养组成及脂质组成
Tab.1 Tissue index，proximate composition and lipid classes of hepatopancreas in cirrhotic and control crab
指标 item肝硬化组 cirrhotic group对照组 control groupp值 p value组织系数 tissue index/%肝胰腺指数 HSI3.76±0.746.67±1.04*0.004水分 moisture 69.92±7.45*51.87±4.430.006常规营养 proximate composition/%粗蛋白质 crude protein7.27±1.13 9.72±0.56*0.008粗脂肪 total lipid14.76±5.87 31.23±4.56*0.004灰分 ash1.33±0.121.11±0.390.164甘油三酯 triglyceride82.75±7.5176.93±5.560.259脂质组成 lipid class/%磷脂 phospholipid10.03±1.59 14.02±1.63*0.018胆固醇脂 cholesteryl ester1.54±0.831.08±0.300.359游离脂肪酸 free fatty acids3.27±1.894.18±1.550.485
注：*表示显著性差异(P<0.05)，下同。Notes：*means significant differences (P<0.05)，et sequentia.
2.3 肝胰腺中脂肪酸组成
两组河蟹肝胰腺中脂肪酸组成的组间差异见表2。粗脂肪酸占比中，肝硬化组肝胰腺中C17：0、C18：0、C20：0、C22：0、C20：1n9和C22：1n9含量均显著高于对照组(P<0.05)，但两组肝胰腺总饱和脂肪酸(ΣSFA)和总单不饱和脂肪酸(ΣMUFA)含量无显著性差异。此外，肝硬化组总多不饱和脂肪酸(ΣPUFA)、n-3 PUFA和n-6 PUFA含量分别为19.69%、4.62%和14.98%，显著低于对照组的30.93%、6.06%和24.83%(P<0.05)。在湿质量百分比中，多数脂肪酸含量在肝硬化组中显著较低，且ΣSFA、ΣMUFA和ΣPUFA在肝硬化组中的含量均显著低于对照组(P<0.05)。尽管如此，两组间n-3/n-6 PUFA的比例无显著性差异(P>0.05)，表明脂肪酸在不同组别间的相对组成比例相对稳定。
表2 肝硬化组与对照组河蟹肝胰腺脂肪酸含量比较
Tab.2 Comparison of fatty acids contents in hepatopancreas between cirrhotic and control crab
脂肪酸fatty acids总脂肪酸total fatty acids湿质量wet weight肝硬化组 cirrhosis group对照组 control groupP值 P value肝硬化组 cirrhosis group对照组 control groupP值 P valueC14:00.63±0.080.55±0.070.1830.07±0.010.12±0.02*0.002C15:00.43±0.080.34±0.060.1220.05±0.010.07±0.01*0.014C16:016.17±1.5917.19±1.360.3671.73±0.173.77±0.30*<0.001C17:00.62±0.06*0.31±0.06<0.0010.07±0.010.07±0.010.824C18:04.55±0.41*3.25±0.290.0020.49±0.040.71±0.06*0.002C20:00.34±0.06*0.18±0.050.0060.04±0.010.04±0.010.639C22:00.37±0.05*0.21±0.030.0020.04±0.010.05±0.010.175ΣSFA23.31±1.5922.13±1.040.2612.49±0.174.85±0.23*<0.001C16:1n74.90±0.905.77±1.240.3030.52±0.101.27±0.27*0.008C18:1n928.90±3.0030.36±3.150.5273.09±0.326.66±0.69*0.001C18:1n74.01±0.553.71±0.390.4080.43±0.060.81±0.09*0.001C20:1n92.10±0.48*1.27±0.250.0220.22±0.050.28±0.050.200C22:1n90.70±0.10*0.42±0.050.0020.07±0.010.09±0.010.065ΣMUFA40.99±2.1441.71±1.990.6404.38±0.229.15±0.44*<0.001C18:2n611.03±3.5020.35±4.03*0.0131.18±0.374.46±0.88*0.002C18:3n30.43±0.081.44±0.18*<0.0010.05±0.010.32±0.04*<0.001C20:3n60.31±0.060.21±0.080.0920.03±0.010.05±0.020.242C20:4n63.64±1.324.27±0.380.4180.38±0.140.96±0.08*0.001C20:3n30.42±0.050.41±0.0 40.7650.04±0.010.09±0.01*<0.001C22:6n30.68±0.340.82±0.040.4210.07±0.010.18±0.07*0.047ΣPUFA19.69±4.5030.93±4.40*0.0122.10±0.486.78±0.97*0.001ΣLC-PUFA8.14±1.209.16±0.540.2160.87±0.121.99±0.110.012Σn-3 PUFA4.62±0.096.06±0.48*0.0080.49±0.011.33±0.10*0.001Σn-6 PUFA14.98±4.5124.83±4.32*0.0201.60±0.485.45±0.95*0.001n-3/n-6 PUFA0.32±0.080.25±0.050.1870.32±0.080.25±0.050.187
注：含量小于0.3%的脂肪酸未在表中列出。Note：The fatty acid less than 0.3% of total fatty acids is not shown.
2.4 肝胰腺中氨基酸组成
肝硬化组与对照组河蟹肝胰腺中各项氨基酸含量的差异情况见表3。结果表明，肝硬化组中总必需氨基酸(ΣEAA)、总非必需氨基酸(ΣNEAA)和总氨基酸(TAA)含量分别为12.39、10.43、22.82 mg/g，显著低于对照组的27.83、22.45、50.28 mg/g。在具体氨基酸方面，肝硬化组中各氨基酸含量均显著低于对照组，但两组间必需氨基酸与总氨基酸的比例(ΣEAA/TAA)无显著性差异(分别为0.54和0.55)，说明两组在氨基酸组成比例方面相对一致。
表3 肝硬化组与对照组河蟹肝胰腺氨基酸含量比较
Tab.3 Comparison on amino acid contents of hepatopancreas in cirrhotic and control crab mg/g湿质量
氨基酸amino acids肝硬化组cirrhosis group对照组control groupP值P value苯丙氨酸 Phe1.40±0.123.04±0.30*<0.001甲硫氨酸 Met0.06±0.010.88±0.07*<0.001赖氨酸 Lys1.70±0.203.86±0.29*<0.001苏氨酸 Thr1.26±0.142.62±0.40*<0.001色氨酸 Trp1.15±0.132.45±0.35*<0.001亮氨酸 Leu1.88±0.203.92±0.28*<0.001异亮氨酸 Ile0.98±0.022.14±0.34*<0.001缬氨酸 Val1.22±0.152.62±0.21*<0.001精氨酸 Arg1.99±0.144.70±0.34*<0.001组氨酸 His0.75±0.101.60±0.13*<0.001总必需氨基酸 ΣEAA12.39±1.5427.83±3.16*<0.001谷氨酸 Glu2.86±0.256.55±0.46*<0.001甘氨酸 Gly1.49±0.113.20±0.09*<0.001丙氨酸 Ala1.76±0.163.06±0.24*<0.001天冬氨酸 Asp2.33±0.245.06±0.41*<0.001酪氨酸 Tyr1.04±0.112.17±0.19*<0.001牛磺酸 Tau0.95±0.102.41±0.22*<0.001总非必需氨基酸ΣNEAA10.43±1.2122.45±2.41*<0.001总氨基酸 TAA22.82±2.4650.28±4.98*<0.001总必需氨基酸/总氨基酸EAA/TAA0.54±0.050.55±0.040.756
3 讨论
3.1 组织形态分析
肝胰腺是甲壳动物营养物质消化和储存的重要器官，其与动物的存活、生长发育和机体健康密切相关[20]。本研究中肝硬化最主要的病变器官就是肝胰腺，通过对比肝硬化组和对照组河蟹肝胰腺组织形态发现，肝硬化组河蟹肝胰腺的肝小管管腔变大，且有的肝小管扭曲破裂，肝小管柱状上皮细胞厚度显著低于对照组。推测肝胰腺作为重要的营养储存和免疫器官，在营养不平衡或者受到病原入侵或养殖水环境胁迫后发生了炎症细胞浸润，导致组织变形和坏死[21]。组成肝胰腺的细胞类型和数量与动物的生理状态密切相关[22]。甲壳动物肝胰腺中R细胞的主要功能是吸收、储存脂质和糖原等物质，并参与解毒过程[23]；F细胞的主要功能是合成和分泌消化酶[24]，而本研究中发现，肝硬化河蟹肝胰腺中R细胞、F细胞和B细胞比例均减少，特别是R细胞，这表明患肝硬化后，肝胰腺对营养物质的消化、吸收及储存将受到显著的影响。营养物质的消耗会导致细胞萎缩，如在河蟹对照组的卵巢发育过程中，大量的营养物质转移至卵巢中，也会导致肝胰腺萎缩[25]。另一方面，炎症会引起细胞的凋亡，从而使得细胞数量减少，最终导致器官的萎缩，这与发现肝胰腺组织外观形态萎缩退化相吻合，而E 细胞是未分化胚性细胞，R、B、F 细胞皆由其分化而来。本研究中发现，E细胞比例显著升高，可能与患病后E细胞分化受抑，无法正常向其他细胞分化有关。
3.2 营养成分分析
肝胰腺在甲壳动物中承担着食物消化、营养吸收、能量储存和解毒代谢等多种重要功能，肝胰腺指数(HSI)的大小在一定程度上反映了肝胰腺营养物质的积累情况[26]。本研究中发现，患肝硬化河蟹HSI降低极为显著，其中主要的营养物质如蛋白质、氨基酸和粗脂肪含量同样显著降低，导致肝胰腺中营养价值显著降低。在常国亮等[27]和冯杨等[28]的研究中，异常蟹的HSI分别比对照组低约10%和20%，而本研究中异常蟹HSI下降幅度达50%，说明本研究中所观测到的肝胰腺退化程度更为严重，可能是受到了更强的病理损伤或应激因素影响。相对于对照组，异常蟹粗蛋白质和粗脂肪均显著较低，其中总脂含量比对照组低50%，常国亮等[27]结果同样表明异常蟹肝胰腺中总脂含量显著较低，说明肝胰腺在患病后受到严重损伤，表现为组织萎缩、营养积累减少，进而影响其正常的消化吸收和代谢功能。本研究中肝硬化组肝胰腺冻干后呈灰白色或者灰黑色，与对照组的橘黄色油脂丰富的外观有明显差别，这主要与粗脂肪含量和脂溶性维生素及类胡萝卜素流失有关，而脂溶性维生素和类胡萝卜素不仅与机体的色泽有关，更与机体免疫和健康密切相关[29]，有研究表明，饲料中添加β-胡萝卜素可以改善幼蟹的肝胰腺肝硬化症状[30]。
本研究中通过脂质组成分析，发现肝硬化河蟹肝胰腺中甘油三酯和胆固醇含量与对照组无显著性差异，但磷脂含量显著较低，这表明肝硬化河蟹脂质代谢发生异常。磷脂作为细胞膜的主要组成成分具有调节膜流动性、维持膜结构完整性和促进膜蛋白功能的作用，是维持细胞生理功能不可或缺的重要物质[31]。已有研究表明，饲料中添加适量磷脂不仅能够提高河蟹的抗氧化能力，还能增强其免疫反应，提升机体对外界不良环境的抵抗力[32]。本研究中发现，肝硬化河蟹体内磷脂水平下降，可能削弱肝胰腺细胞膜的稳定性与选择通透性，使其更易受到外界应激因子和病原微生物的侵袭，从而加剧组织损伤，最终导致较高的死亡率。此外，河蟹肝胰腺中的脂肪酸组成易受饲料中脂肪酸组成的直接影响，特别是在养殖过程中饵料脂质来源和质量的变化对肝胰腺脂质沉积和代谢具有重要调控作用[33]。本研究中观察到患肝硬化河蟹肝胰腺中脂肪酸总量及粗脂肪含量显著低于对照组，这可能与其摄食量减少、摄食选择性改变或脂质吸收障碍有关，进一步影响了能量储存与脂质功能的发挥。多不饱和脂肪酸(PUFAs)，尤其是二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳四烯酸(ARA)，在维持免疫稳态、调节细胞信号传导、缓解炎症反应及增强机体抗低氧应激能力方面发挥着关键作用[34]。本研究中发现，患肝硬化的河蟹体内PUFAs含量显著下降，由此可以推断，脂质代谢紊乱，特别是磷脂和多不饱和脂肪酸的合成或积累障碍，可能是导致肝硬化河蟹抗应激能力下降、免疫功能减弱和抗逆性降低的重要原因之一。
3.3 肝硬化与肝胰腺坏死异同分析
本研究中首次报道了中华绒螯蟹在养殖过程中出现的“肝硬化”病理特征，虽然与正常蟹相比其在组织结构和营养成分方面均表现出明显异常，但与现有文献中广泛报道的肝胰腺坏死综合征(hepatopancreatic necrosis syndrome，HPNS)仍存在实质性差异。HPNS是目前河蟹最常见的肝胰腺相关疾病，典型症状包括肝胰腺颜色由橘黄色转变为灰白或乳白，组织结构疏松，伴随蟹体消瘦、摄食减少及免疫力下降。外部体征表现为体表发黑，附肢肌肉及鳃部变黑等全身性病变；组织学层面则可见肝胰腺肿大或白化，上皮细胞广泛空泡化，严重者肝小管结构紊乱甚至完全崩解[12，28]。相比之下，本研究中观察到的肝硬化个体外观未见明显病变，仅表现为壳软、活力减弱。组织解剖显示，其肝胰腺存在局部或多发性肝小管管腔内致密物质沉积，上皮细胞厚度显著降低，最终导致典型的多角星形结构消失。尤为重要的是，组织切片未见典型的空泡化或细胞溶解现象，而是呈现出管腔内结构致密、排列紧凑、类似纤维化的改变，提示该病变更可能由营养代谢紊乱、长期环境胁迫或慢性感染等因素引起，属于一种慢性损伤过程，而非HPNS所表现的急性坏死性病变。此外，肝胰腺细胞组成分析表明，肝硬化个体中R细胞比例显著下降，E细胞比例则明显升高，反映出组织更新受阻或细胞分化调控紊乱，这一变化亦不同于HPNS中以细胞空泡化和解体为特征的急性病变模式。综上所述，尽管肝硬化与HPNS在某些表型特征上存在一定相似性，但其在组织形态结构、细胞组成及营养代谢等方面表现出本质区别，推测其更可能是一种独立的、由慢性应激诱导的病理状态，而非HPNS的某种变异或阶段性表现。未来可通过分子标志物分析、慢性毒理试验及病原学检测进一步验证其独立性与发病机制。
4 结论
1)研究发现，肝硬化河蟹肝胰腺组织发生了显著的变形，肝小管管腔被致密物质填充，导致多角星形结构消失，上皮细胞厚度显著减少。同时，肝胰腺的R细胞比例减少，E细胞比例显著增加，反映了组织结构和细胞组成的严重改变。
2)肝硬化河蟹肝胰腺指数(HSI)显著低于正常对照组，且其肝胰腺中的粗蛋白质、粗脂肪和磷脂含量都低于对照组，表明肝硬化影响了肝胰腺的营养储存和代谢功能。
3)肝硬化组的多不饱和脂肪酸(PUFAs)含量，尤其是n-3 PUFA和n-6 PUFA的含量显著低于对照组。此外，肝硬化组的总氨基酸含量也低于对照组，表明营养物质的消化和吸收能力受到了严重影响。
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