小鳞拟松鲷Datnioides pulcher，俗称印度尼西亚虎鱼，隶属于鲈形目Perciformes拟松鲷科Lobotidae拟松鲷属Datnioidide，是一种重要经济鱼类。自然分布于东南亚半岛的湄南河流域、湄公河流域，以及印尼苏门答腊及加里曼丹岛西部等低纬度热带地区。小鳞拟松鲷属于猎食性鱼类，喜捕食活饵。因其肉味鲜美，肌间刺较少，在原产地主要作为食用鱼。中国无拟松鲷鱼类的自然分布，主要作为名贵观赏鱼被引入，常用来与龙鱼混养，寓意“龙腾虎跃”。国内外对拟松鲷鱼类的研究鲜有报道，仅见对曼谷拟松鲷Datnioides undecimradiatus[1]和小鳞拟松鲷[2]两种拟松鲷线粒体的相关研究，以及对小鳞拟松鲷[3]微卫星特征的分析研究，而在其他方面如形态特征、生长特性及染色体核型等方面的研究尚未见报道。补充小鳞拟松鲷基础生物学资料，可为更深层次的研究打下基础。
形态学性状是鱼类类别的划分依据，同时受到行为、环境及季节变化等多方面的影响[4]。掌握鱼类生长发育特性及规律，可丰富其生长基础研究，也可为鱼类常规化养殖提供指导。目前，有关鱼类形态结构与生长发育特性的研究较多[5-6]，但有关小鳞拟松鲷尚无相关报道。因此，本研究中拟对小鳞拟松鲷的内外部形态特征、生长特性及核型特征等进行研究，以期为补充小鳞拟松鲷基础生物学资料，并为其分类鉴定和养殖提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 材料
试验共用两批不同批次的试验鱼，用于内外部形态特征、染色体制备研究的成鱼于2017年由印度尼西亚引进，用于生长特性试验的幼鱼于2018年11月经进口鱼商从印度尼西亚购进，均养殖于中国水产科学研究院珠江水产研究所观赏渔业基地。
1.2 方法
1.2.1 形态特性试验 随机挑选10尾小鳞拟松鲷成鱼作为解剖样本，对其各鳍条数目及鳍条与条纹的相对位置进行记录统计，并观察各鳍条是否存在分支鳍条。统计侧线鳞及测线上下方的鳞片数目、左右两边鳃弓数目及外鳃弓鳃耙数目，并解剖试验样本观察其内部各器官形态特征。
1.2.2 幼鱼生长特性试验 生长特性试验期间，试验幼鱼养殖在水族缸(130 cm×45 cm×55 cm)中，水温稳定在30 ℃左右，缓慢循环水流，持续曝气。每天投喂一次冷冻过的红虫、小虾及鱼肉，投饵量约为池内鱼体总质量的3%～5%。生长特性试验开始共养殖50尾120日龄的小鳞拟松鲷幼苗，幼鱼初始体质量为(0.84±0.31)g，体长为(3.71±0.36)cm，养殖试验持续155 d，试验结束时幼鱼剩余41尾，期间死亡9尾。试验过程中，在120、135、165、182、197、212、260、275日龄时，随机取30尾试验鱼，使用斯乐疲，按说明书剂量进行麻醉，然后测量鱼体全长、体长、体高、头长、眼径、口裂长、体宽、眼间距等指标数据(图1)(精确到0.01 cm)，鱼体质量使用电子天平称量(精确到0.01 g)。前后采集8次共240个数据。可量性状的测量依据孟庆闻等[7]的方法。采用m=aLb(a为生长的条件因子，b为幂指数)研究其体质量与体长的关系。
1.2.3 染色体核型分析 染色体制备参照朱新平等[8]的方法。挑选2尾小鳞拟松鲷雄性成鱼头肾及中肾作为试验材料，其中，2尾鱼体质量分别为376、435 g，体长分别为28.5、31.1 cm，染色体制片完成后用显微镜进行观察，100倍油镜下拍照，取115个状态较好的中期分裂相细胞，确定染色体的数目，并选出10个分散良好、形态清晰的染色体分裂相细胞，参照Levan等[9]的染色体分类标准进行分类排列。
1.2.4 生长指标计算 各项生长指标计算公式为
瞬时生长率=(lnm2-lnm1)/(t2-t1)×100%，
体质量日均增量mz=(m2-m1)/(t2-t1)，
体长日均增量Lz=(L2-L1)/(t2-t1)，
肥满度K=m/L3×100%。
其中：m1、m2分别为养殖t1、t2时的体质量(g)；t1和t2分别为不同的养殖时间(d)；L1、L2分别为养殖t1、t2时的体长(cm)；m、L分别为鱼体质量(g)和体长(cm)。
1.3 数据处理
试验数据以平均值±标准差(mean±S.D.)表示，使用Photoshop CC 2017制作染色体组型图，使用 Excel 2016进行数据统计分析，计算可量形状间各项比值，绘制生长曲线图及绘制试验鱼的核型模式图[10]。
2 结果与分析
2.1 外部与内部形态特征
2.1.1 外部形态特征 小鳞拟松鲷成鱼体侧扁，侧面观近似橄榄形,体色呈暗黄色，体表有若干条黑色条纹，黑条呈现空心或间断。条纹数分布较特殊，大部分小鳞拟松鲷鱼体两侧黑纹均为7条或8条，也存在极其特殊的个体，如鱼体一侧有7条黑纹，而另一侧有8条黑纹，即两侧黑纹数量不一致。大部分小鳞拟松鲷第一条暗纹身体左右两侧不相连，其余暗纹于背部相连，在腹部有部分相连。第一条暗纹贯穿眼部，最后一条暗纹在尾柄端，鳃盖延伸至第二条暗纹处。
小鳞拟松鲷成鱼吻尖、口裂中等、左右对称，下颌长于上颌，牙齿发达。左右两侧各两个鼻孔，呈前后分布。眼大，凸出，眼间距大。体被细小鳞片，左右两边侧线明显，起始于第二条暗纹，呈弓形延伸至尾柄处。弓形顶点位于第三条暗纹处，随后侧鳞线位置逐渐降低。
侧线鳞106～113，侧线上鳞18～25，侧线下鳞34～36。背鳍分为第一背鳍和第二背鳍且相连。其中，第一背鳍存在坚硬鳍棘，起始于第二条与第三条暗纹之间，终止于第五条暗纹附近，第二背鳍存在分支鳍条，延伸至尾柄处。胸鳍无硬棘，存在分枝鳍条。腹鳍胸位，有鳍棘，位于第二条与第三条暗纹之间，存在分支鳍条。臀鳍有鳍棘，尾鳍相比较其体型较大，介于扇形与截形之间。小鳞拟松鲷的鳍式为：(D.)背鳍Ⅺ～Ⅻ 15～17，胸鳍(P.) 16～18，腹鳍(V.)Ⅱ 5～7，臀鳍(A.)Ⅲ～Ⅳ 9～12，尾鳍(C.)15～17；脊椎骨数量为22～24。小鳞拟松鲷成鱼体长最大可达55 cm，体质量可达3 587 g(图2)。
小鳞拟松鲷左右两边各具4 条鳃弓(图3)，每条鳃弓上有2个半鳃，共8个半鳃，且鳃间隔不发达，第一条鳃弓外鳃耙16～19条，具有6枚鳃盖条骨。
2.1.2 内部形态特征 小鳞拟松鲷具有22～24节脊椎骨及8根肋骨，肌间刺较少；心脏有明显的动脉球；左右两侧均有性腺,呈对称分布，于泄殖孔处相连，雌鱼怀卵量大，卵直径小；胃部较大、胃壁厚、肠道较短；肝脏呈红色，两叶；胆囊呈黄绿色，脾脏呈黑褐色；头肾位于脊椎骨最前方的下部，中肾依附在脊椎骨下部呈暗红色；无鳔管(图4)。
1—全长；2—体长；3—头长；4—眼径；5—体高；6—口裂长；7—体宽；8—眼间距。
1—total length；2—body length；3—head length；4—interorbital；5—body height；6—crack length；7—body width；8—eye spacing.
图1 小鳞拟松鲷测量指标
Fig.1 Measured indices of Datnioides pulcher
图2 小鳞拟松鲷外部形态及鳞片
Fig.2 External morphology and scale of Datnioides pulcher
2.2 生长特征
2.2.1 可量与可比性状 本试验中在8个日龄时间点均测量小鳞拟松鲷幼鱼全长、体长、体高、头长、眼径、口裂长、体宽、眼间距等8个可量数据指标，并计算可比性状比例，取其平均值，结果如表1所示。
图3 小鳞拟松鲷右侧鳃弓
Fig.3 Right gill arch of Datnioides pulcher
1—肝脏；2—胃；3—脾脏；4—肠；5—精巢；6—卵巢。
1—liver；2—stomach；3—spleen；4—intestine；5—testis；6—ovary.
图4 小鳞拟松鲷内部结构(左雄右雌)
Fig.4 Organs of Datnioides pulcher (left:male;right:female)
表1 小鳞拟松鲷形态可量性状比值(n=240)
Tab.1 Morphological measurable proportionate character values of Datnioides pulcher(n=240)
性状比例character proportion平均值±标准差mean±S.D.全长/体长 total length/body length1.15±0.04体长/体高 body length/height2.38±0.09体长/体宽 body length/width5.49±0.51体长/头长 body length/head length2.94±0.19头长/眼径 head length/interorbital3.57±0.47头长/眼间距 head length/eye spacing2.60±0.47体高/体宽 body height/width2.30±0.19头长/口裂长head length/mouth crack length6.52±1.36体宽/眼间距body width/eye spacing1.40±0.26
2.2.2 幼鱼全长、体质量与体长的相关性 小鳞拟松鲷幼鱼8个日龄时间点的数据见表2，其中，165日龄时瞬间生长率最大，生长最快。对表2的体长、全长和体质量数据进行统计分析，结果表明，全长与体长的关系式可用y=1.123x+0.141 2(R2=0.998 6)表示，而体质量与体长的关系符合幂函数关系式，其关系方程为y=0.025 3x3.025 1(R2=0.991 2)，为异速生长(图5)。
表2 小鳞拟松鲷幼鱼生长性能
Tab.2 Growth of juvenile Datnioides pulcher
日龄/dage全长/cmtotallength 体长/cmbodylength体质量/gbodymass瞬时生长率/(%·d-1)instantaneous growth rate日均增量/g,cmdaily increment全长total length 体长body length体质量body mass体长body length肥满度/%condition factor1203.71±0.363.16±0.320.84±0.312.741353.95±0.413.40±0.331.04±0.361.420.420.0130.0162.651655.04±0.514.36±0.432.22±0.752.530.810.0390.0322.681825.47±0.534.73±0.452.74±0.921.240.480.0280.0222.591976.04±0.675.23±0.603.83±1.292.230.660.0360.0332.682126.48±0.775.67±0.885.19±2.302.030.470.0290.0292.852608.94±0.947.85±0.8613.54±4.641.960.670.1700.0422.802759.39±0.968.22±0.8315.71±5.100.990.330.1450.0252.83
图5 全长、体质量与体长的关系曲线
Fig.5 Curve of total length and body mass versus body length
2.3 核型特征
2.3.1 染色体数目 从2个试验个体的染色体玻片中，选取115个小鳞拟松鲷中期分裂相良好的染色体进行统计分析，结果见表3。根据众数原理，确定小鳞拟松鲷的二倍体染色体数目为2n=48。
表3 小鳞拟松鲷染色体数目统计
Tab.3 Chromosome number statistics of Datnioides pulcher
染色体数目number of chromosome分裂项数目number of metaphase比率/%proportion of number of metaphase<461412.174632.61487363.485076.095243.48>521412.17
注：染色体数中分裂项数目占观察数(115个)的比例。
Note:The ratio of the number of division phase in the number of chromosomes to the number of observations (115).
2.3.2 核型 小鳞拟松鲷染色体中期分裂相及配对结果见图6，根据染色体臂比将染色体分为2个中部着丝点染色体(m)、2个亚中部着丝点染色体(sm)、20个亚端部着丝点染色体(st)和24个端部着丝点染色体(t)。核型公式为2n=48=2m+2sm+20st+24t，臂数(NF)=52。
染色体臂比的统计结果如表4所示，其中染色体中无异型性染色体、次缢痕及随体等典型性特征。
小鳞拟松鲷、奥利亚罗非鱼[11]和淡水黑鲷[12]等鲈形目鱼类的核型公式及部分参数比较见表5，由核型公式可知，在染色体类别中小鳞拟松鲷的t型占比较大，m型占比较小。
3 讨论
3.1 小鳞拟松鲷形态特征
小鳞拟松鲷与中国本土分布的斑鳜Siniperca scherzeri[13]、鳜Siniperca chuatsi[14]等鱼类形态比较接近。将小鳞拟松鲷与斑鳜、鳜3种鱼类形态数据进行比较(表6)，可以看出，小鳞拟松鲷与斑鳜、鳜鳍式接近，差别主要在于斑纹及体长与体高之比。斑鳜体被不规则小斑点，尾鳍存在空心斑[13]，鳜体侧有狭长黑纹，不规则暗棕斑点及斑块[15]，而小鳞拟松鲷体被黑色条纹，会出现空心纹。斑鳜体长与体高之比为3.4～4.0[13]，小鳞拟松鲷为2.19～2.60，明显比斑鳜体形更短而高。鳜体长与体高之比为2.2～3.1[15]，与小鳞拟松鲷体型上相似。这表明，拟松鲷科与鱼旨科在鲈形目中是亲缘关系比较接近的两个科。
m—中部着丝粒；sm—亚中部着丝粒；st—亚端部着丝粒；t—端部着丝粒。
m—metacentrics;sm—submetacentrics;st—subtelocentrics;t—telocentrics.
图6 小鳞拟松鲷染色体核型
Fig.6 Karyotype of Datnioides pulcher
表4 染色体的相对长度和臂比值
Tab.4 Chromosome length and arm ratio
编号No.相对长度relative length臂比arm ratio类型type编号No.相对长度relative length臂比arm ratio类型type15.53±0.201.53±0.33m134.44±0.42>7t25.41±0.262.18±0.41sm144.43±0.19>7t34.29±0.123.74±0.74st154.36±0.27>7t44.24±0.333.66±0.28st164.29±0.08>7t54.15±0.553.74±0.77st174.28±0.27>7t64.04±0.383.58±0.42st184.22±0.33>7t73.98±0.263.68±0.55st194.19±0.21>7t83.97±0.273.19±0.25st204.02±0.41>7t93.96±0.243.76±0.32st214.00±0.22>7t103.89±0.183.58±0.44st223.84±0.16>7t113.79±0.153.49±0.13st233.65±0.33>7t123.57±0.253.15±0.26st243.46±0.25>7t
表5 小鳞拟松鲷、奥利亚罗非鱼与淡水黑鲷的核型公式及部分参数比较
Tab.5 Comparison of karyotypes and some parameters among Datnioides pulcher，Oreochromis aurea and Hephaestus fuliginosus
种类species核型公式karyotype染色体数(2n)chromosome number染色体臂数number of chromosome arm文献来源reference小鳞拟松鲷 Datnioides pulcher2m+2sm+20st+24t4852本文奥利亚罗非鱼 Oreochromis aurea6sm+24st+14t4450曹丽萍等[11]淡水黑鲷 Hephaestus fuliginosus4m+44t4652孟庆磊等[12]
3.2 小鳞拟松鲷生长特性
幼鱼体质量与体长的关系可反映鱼类的生长状态[16]。有研究表明，不同温度下哲罗鱼Hucho taimen幼鱼[17]、达氏鳇与西伯利亚鲟杂交幼鱼[18]及黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco幼鱼[19]等均呈现异速生长[20]。本研究中生长试验共进行了155 d，对试验数据分析表明，小鳞拟松鲷在幼鱼阶段的生长类型也为异速生长，试验鱼体质量生长速度快于体长的生长速度，鱼的体型趋向于短宽型。在实际养殖生产中，可依据体长与体质量幂函数关系式，对小鳞拟松鲷生长发育规律做出推测，并以此决定饵料投喂量，避免养殖成本的增加，以实现利益最大化。
表6 小鳞拟松鲷与斑鳜、鳜主要性状对比
Tab.6 Comparison of main characters of Datnioides pulcher with spotted mandarinfish Siniperca scherzeri and mandarinfish Siniperca chuatsi
性状character背鳍dorsal fin臀鳍anal fin胸鳍pectoral fin腹鳍pelvic fin侧线鳞lateral line椎骨vertebra体长/体高body length/body height体长/头长body length/head length头长/眼径head length/interorbital小鳞拟松鲷Datnioides pulcherⅪ～Ⅻ15～17Ⅲ～Ⅳ9～1216～18Ⅱ5～7106～11322～242.19～2.602.29～3.832.70～5.35斑鳜[13]Siniperca scherzeriⅫ～10～12Ⅲ～Ⅳ7～9Ⅰ 15Ⅰ 6104～124263.4～4.02.6～2.94.8～5.9鳜[14]Siniperca chuatsiⅫ 13～15Ⅲ 9～1115～16Ⅰ 5120～140—2.2～3.12.3～3.05.7～7.1
3.3 小鳞拟松鲷核型分析
本研究中采用活体注射植物血凝素(PHA)法制备染色体。一般情况下，秋水仙素处理时间有2、5、4 h 3种[21-22]，本试验中，小鳞拟松鲷染色体制备所需秋水仙素处理时间为2 h时，获得的染色体分裂相更为理想。不同种鱼类染色体制备需要的低渗时间不同，本研究中低渗时间为25 min效果最好，所获得的染色体分裂相最多。
鲈形目鱼类在鱼类系统发生系统中处于高位类，m和sm型染色体较少，而t和st型染色体较多[20]。对已做过核型分析的57种鲈形目研究发现[23]，染色体数目为48的鱼类占57.9%，反映了多数鲈形目鱼类的染色体数目特征。本研究中，染色体数目多于48的，可能是多个染色体细胞破裂后染色体叠加导致，而染色体数目少于48，可能是细胞破裂时染色体散失导致的，因此，染色体数目会存在随机性差异。研究表明，同种鱼类其性别也会影响核型公式。而本研究中用于染色体分析的2个试验个体均为雄性，故并未观察到有性别影响核型公式的现象[24]。
染色体是遗传物质的载体，每个物种都具有独特的染色体，鱼类的染色体核型类型与其进化程度存在一定的关系[25]。进化上越是处于上位，其染色体臂越收敛，端着丝点染色体多，染色体臂数越少，并以此将真骨鱼类划分为低位类、中位类和高位类3个演化群体。由小鳞拟松鲷的核型公式可知，t和st型染色体较多，在演化上属于高位类。胡国宏等[22]认为，具有较多t型染色体的物种较为原始，具有较多m和sm型染色体的物种是特化种类，即染色体臂数较多的种类为进化类型。小鳞拟松鲷存在较多的t型染色体，因此，在进化中属于较为原始的物种。
4 结论
1)本研究中首次对小鳞拟松鲷内部各器官、内外部形态特征进行了具体描述。
2)小鳞拟松鲷在幼鱼阶段的生长类型为异速生长，全长与体长呈线性关系，体质量与体长呈幂函数关系。
3)小鳞拟松鲷核型公式为2n=48=2m+2sm+20st+24t，NF=52，核型符合高位类鱼类形态特征，染色体中无异型性染色体、次缢痕及随体等典型性特征。
[1] WANG L,CHEN Z Z,GAO J Z,et al.The complete mitochondrial genome of Mekong tiger fish Datnioides undecimradiatus (Roberts & Kottelat,1994)[J].Mitochondrial DNA Part B,2016,1(1):367-368.
[2] WANG L,CHEN Z Z,GAO J Z,et al.The complete mitochondrial genome of Indonesian tiger fish Datnioides microlepis (Bleeker 1854)[J].Mitochondrial DNA Part B,2016,1(1):328-329.
[3] 屈政委,宋红梅,汪学杰,等.印尼虎鱼RAD-seq数据中微卫星标记的初步筛选及特征分析[J].淡水渔业,2019,49(4):9-15.
[4] 汪学杰,牟希东,胡隐昌,等.布氏鲷形态特征和染色体核型的研究[J].大连水产学院学报,2010,25(2):187-190.
[5] 李文龙,韩英,石振广,等.达氏鳇稚幼鱼生长特性的研究[J].大连海洋大学学报,2012,27(2):125-128.
[6] 黄小林,杨育凯,李涛,等.黄斑篮子鱼仔、稚、幼鱼形态观察与生长研究[J].南方水产科学,2018,14(5):88-94.
[7] 孟庆闻,缪学祖,俞泰吉,等.鱼类学[形态·分类][M].上海:上海科学技术出版社,1989:173-177.
[8] 朱新平,邹国民,胡红,等.何氏细鲃鱼染色体组型[J].遗传,1990,12(3):20-21.
[9] LEVAN A,FREDGA K,SANDBERG A A.Nomenclature for centromeric position on chromosomes[J].Hereditas,1964,52(2):201-220.
[10] 乔永刚,宋芸.利用EXCLE制作核型模式图[J].农业网络信息,2006(10):97-98.
[11] 曹丽萍,丁炜东,贾永义,等.奥利亚罗非鱼(♀)×鳜(♂)杂交后代及其双亲的染色体核型分析[J].农业生物技术学报,2006,14(2):187-190
[12] 孟庆磊,安丽,王成武,等.淡水黑鲷染色体核型分析[J].淡水渔业,2010,40(3):76-79.
[13] 骆小年,梁旭方,周怡,等.斑鳜养殖生物学研究进展[J].水产科学,2014,33(1):56-62.
[14] 李明峰.鳜鱼生物学研究进展[J].现代渔业信息,2010,25(7):16-21.
[15] 沈文新.鳜鱼的生物学特征及鳜鱼苗的人工繁殖技术[J].上海农业科技,2018(4):70-71.
[16] 华元渝,胡传林.鱼种质量与长度相关公式(W=aLb)的生物学意义及其应用[M]//中国鱼类学会.鱼类学论文集.北京:科学技术出版社,1981:125-131.
[17] 赵晓临,徐浩然,孙玉芝,等.哲罗鱼稚、幼鱼在不同温度下的生长特性[J].水产学杂志,2018,31(5):1-5.
[18] 刘建魁,李文龙,石振广,等.达氏鳇(♀)×西伯利亚鲟(♂)杂交幼鱼生长特性初步研究[J].淡水渔业,2008,38(6):63-67.
[19] 宋学宏,陈祖培,王志林,等.黄颡鱼当年幼鱼的生长特性[J].水利渔业,2003,23(4):3-5.
[20] KAN M K I,KHATUN M J,KIBRIA A K M G.Study the quality of eggs of different genotypes of chickens under semi-scavenging system at bangladesh[J].Pakistan Journal of Biological Science,2004,12(7):2163-2166.
[21] 梁述章,宋炜,蒋科技,等.棘头梅童鱼染色体核型分析[J].渔业科学进展,2019,40(4):172-177.
[22] 胡国宏,孙广华,张雅斌,等.怀头鲇的核型分析[J].大连水产学院学报,2005,20(4):318-321.
[23] 楼允东.鱼类育种学[M].北京:中国农业出版社,1999:335-337.
[24] ZHANG S K,ZHENG J,ZHANG J,et al.Cytogenetic characterization and description of an X1X1X2X2/X1X2Y sex chromosome system in Collichthys lucidus (Richardson,1844)[J].Acta Oceanologica Sinica,2018,37(4):34-39.
[25] 小岛吉雄.鱼类细胞遗传学[M].林义浩,译.广州:广东科学技术出版社,1990:8-33.