不同温度下4种常见孔雀鱼的盐度耐受极限试验

孔雀鱼Poecilia reticulate别名凤尾鱼，因颜色艳丽又称其为彩虹鱼[1]，其隶属于脊索动物门、硬骨鱼纲、鳉形目、花鳉科、花鳉属[2-5]。雄鱼体长为4～5 cm，色彩鲜艳[6]，雌鱼体长约为7 cm。孔雀鱼品种繁多，根据尾鳍形状分为圆尾、扇尾、双剑尾、三角尾、大尾等[7]。寄生虫类疾病是夏季孔雀鱼养殖中的多发疾病，严重影响孔雀鱼产业发展，在养殖场中多采用杀虫剂进行防控。孔雀鱼作为广盐性鱼类，也可以通过调节养殖水体的盐度对寄生虫类疾病进行防控，水体盐度的升高能够影响病原微生物的渗透压稳定，从而降低其活性。同时，盐度的增加会导致鱼体表急剧分泌黏液，并随着附着病原菌流失有效缓解外部病原菌寄生[8-10]。因此，研究孔雀鱼盐度耐受极限是防控孔雀鱼病原微生物滋生的有效途径。本研究中，通过在不同温度和盐度环境下进行孔雀鱼盐度耐受极限研究，以期为生产中通过调节环境盐度防控孔雀鱼寄生虫类疾病提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 材料

试验用豹点、象牙白、红扇、冰蓝等4个品系的孔雀鱼均由辽宁省辽阳市和一观赏鱼合作社提供，运至辽宁省北方鱼类应用生物学与增养殖重点实验室后暂养于200 L的蓝色聚乙烯水槽中48 h，待试验鱼适应养殖环境后开始试验。

1.2 方法

1.2.1 预试验孔雀鱼属广盐性鱼类，对水体环境适应能力强。在试验前对孔雀鱼可适盐度范围进行基础试验，确定孔雀鱼致死浓度和试验变量。预试验主要流程为：设置3个25、30、35盐度组，温度为22～24 ℃，每组投放5尾健康优质的孔雀鱼进行观察。结果表明：在盐度为35的试验组中，孔雀鱼入缸即出现死亡；在盐度为30的试验组内2 h开始发生死亡；盐度为25的试验组内死亡速度较慢，并逐渐适应水体环境。因此，选取盐度为25～30的中间盐度28为此次试验的最高盐度。

1.2.2 试验设计试验采用透明养殖玻璃缸(30 cm×40 cm×30 cm)饲养孔雀鱼，试验期间投喂意牌小型鱼专用鱼粮(主要成分为白鱼粉、虾粉、酵母等)。放鱼前使用折射盐度计(红海Redsea，测量范围为1.000～1.030)测量盐度，使用温度计(测温范围0～50 ℃)测量温度。

试验分别设置0、20、28 3个盐度条件，在每个盐度条件下，分别设置16、22、28 ℃ 3个温度组，每组放孔雀鱼6尾，每组均设3个重复。盐度为20时每隔1 h观察1次，盐度为28时每隔30 min观察1次，盐度为0(曝气的自来水)时每隔2 h观察1次。

试验过程中各组光照强度(室内自然光照)和日换水量(15 L)均相同，主要观察孔雀鱼的死亡数、游泳状态、流动形态和活力状态等并准确记录，计算半致死时间(LT50)。判断孔雀鱼是否真正死亡时，不仅观察孔雀鱼是否停止本能运动(如鳃盖的活动等)，更要观察是否还有其他应激反应[11]。

1.3 数据处理

采用Excel 2007和SPSS 20.0软件进行数据处理分析，利用方差分析分别检验温度与盐度对4种孔雀鱼的显著性影响。以温度、盐度为变量进行双因素方差分析，显著性水平设为0.05，极显著性水平设为0.01。试验数据均采用平均值±标准差(means±S.D.)表示。

2 结果与分析

2.1 不同盐度和温度条件下孔雀鱼的应激反应

孔雀鱼在盐度为0、20、28条件下各时间段的定性观察结果如表1～表3所示。在盐度为0时，4个品系孔雀鱼在各温度下活力均正常，无死亡现象；在盐度为20时，4个品系孔雀鱼在24 h内活力均下降，72 h内全部死亡；在盐度为28时，4个品系孔雀鱼在10 h内全部死亡。

2.2 不同温度、盐度条件下孔雀鱼的半致死时间

由试验结果可知，盐度为0时4种孔雀鱼均未出现死亡。应用Excel 2007软件中曲线方程得出4种孔雀鱼在盐度为20、28，温度为16、22、28 ℃时的半致死的时间如表4、表5所示，应用因素方差分析得出温度对孔雀鱼盐度耐受极限的影响如表6所示。

从表4可见：低盐(盐度为20)条件下，随着温度的升高，豹点、红扇孔雀鱼发生半致死的时间逐渐延后；象牙白、豹点、冰蓝3种孔雀鱼不同温度间均无显著性差异(P>0.05)，红扇孔雀鱼在28 ℃时的LT50 显著高于其他温度时(P<0.05)；温度为16 ℃和22 ℃时，4种孔雀鱼的LT50 无显著性差异(P>0.05)，红扇孔雀鱼在28 ℃时的LT50 显著高于其他品种(P<0.05)。

从表5可见：高盐(盐度为28)条件下，随着温度的升高， 4种孔雀鱼发生半致死时间缩短，豹点孔雀鱼在温度为16 ℃和28 ℃时LT50 有显著性差异(P<0.05)，冰蓝孔雀鱼在温度为16 ℃时LT50 显著高于22 ℃和28 ℃时(P<0.05)；温度为16 ℃时，豹点、冰蓝孔雀鱼LT50 显著高于红扇、象牙白孔雀鱼(P<0.05)；温度为22 ℃时豹点孔雀鱼LT50 显著高于其他3种孔雀鱼(P<0.05)；28 ℃时，4种孔雀鱼LT50 无显著性差异(P>0.05)。

对温度、盐度的方差分析表明(表6)：相同温度下，盐度显著影响孔雀鱼的半致死时间(P<0.05)；象牙白及冰蓝孔雀鱼，温度与盐度间并无明显的交互作用(P>0.05),温度对其半致死时间也无显著性影响(P>0.05)；对于豹点和红扇孔雀鱼，温度与盐度间存在显著的交互作用(P<0.05)，温度对其半致死时间也有显著性影响(P<0.05)。这表明，温度显著影响孔雀鱼盐度的耐受性。

注：同列中标有不同大写字母者表示组间有显著性差异(P<0.05)，同行中标有不同小写字母者表示组间有显著性差异(P<0.05)，标有相同字母者表示组间无显著性差异(P>0.05),下同

Note:The means with different capital letters within in the same column are significantly different at the 0.05 probability level, the means with different small letters within in the same line being significantly different at the 0.05 probability level, and the means with the same letters are not significant differences, et sequentia

Note: *means significant effect(P<0.05)，** means very significant effect(P<0.01)

3 讨论

3.1 孔雀鱼对盐度的耐受机制

不同水生动物的盐度生存范围各不相同，孔雀鱼属广盐性硬骨鱼类，能够在宽泛的盐度范围内生存[12]。本研究中4种孔雀鱼在盐度为20、温度为28 ℃时，均有试验鱼存活72 h以上。这与孔雀鱼渗透压有关，盐度对渗透压影响较大，海水渗透压为1000 mOsm/kg左右，淡水的渗透压为0.1 mOsm/kg左右，硬骨鱼类体内渗透压较高，可达到250～500 mOsm/kg。孔雀鱼在盐度为20、28时，其摄食能力、游泳状态和活力均有所降低，正是由于盐度可通过渗透压调节对硬骨鱼类产生影响[13-17]。硬骨鱼在渗透压较高的环境中会失去部分水分，此时肠道会补给水分导致大量吸收盐分到鱼体内，同时，会通过鳃、皮肤等渗透调理器官将体内多余盐分排出，以达到离子平衡。反之，当环境渗透压较低时会造成鱼体盐分的缺失，此时，除吸收食物中的盐分，鱼还可利用鳃从水中摄取盐补充盐分[18]。例如，罗非鱼在盐度为24时，摄食量会减弱，当盐度达到32时，会出现异常状态，如游泳状态改变、体表颜色变深等[19]。

3.2 温度、盐度对孔雀鱼半致死时间的影响

温度和盐度是水产动物生活环境中两个重要的理化因子[20-23]，他们的改变会引发鱼体生理变化，导致内环境稳定受到一定影响[14, 24-25]。盐度能够引起鱼体对渗透压的调节[26]。温度对鱼类体内能量流动具有重要的调节作用，能够控制鱼类代谢反应速率，是影响鱼类生理活动的重要环境变量[27]，在高盐环境下温度的改变可能影响鱼类的存活率。本试验中，高盐(盐度为28)环境下，随着水体温度的升高，4种孔雀鱼的半致死时间均缩短。这一结果与李莉[28]对刺参的研究结果基本一致，稚参对高盐度的耐受性随着暂养温度的升高而降低；另一方面，在低盐(盐度为20)条件下，仅28 ℃时红扇孔雀鱼半致死时间显著延长，但此盐度下温度对其余试验组孔雀鱼的盐度耐受性并无显著影响，造成这种结果的原因可能是由于孔雀鱼属广盐性鱼类，盐度20并未超出其适宜范围，在这个盐度下，环境温度的改变并不能直接引起孔雀鱼的死亡。周伟江等[29]对达里湖鲫的研究发现，鱼类在生存盐度发生变化的过程中，鳃的结构会有明显的适应性改变，尤其是鳃丝中Na+/K+- ATP酶活性。Na+/K+- ATP酶活性的变化会直接影响细胞能量代谢、离子跨膜运输等，从而导致细胞的形态、结构、功能异常，当应激时间超过一定限度时，鱼体则出现死亡现象[30]。O’Connor等[31]对珍珠贝Pinctada imbricata的研究表明，当超过适宜范围时，温度、盐度共同作用影响珍珠贝的生长发育，两者间存在交互作用。本研究结果表明，盐度与温度的交互作用同样对豹点、象牙白的半致死时间有重要影响，因此，在豹点、红扇孔雀鱼养殖中，通过调节水体盐度对寄生虫类疾病进行防控及治疗时, 要考虑温度与盐度互作效应的影响。

温度能够显著影响孔雀鱼的盐度耐受极限，温度和盐度的交互作用对豹点和红扇孔雀鱼的半致死时间有显著影响。在盐度为28的环境下，升高水温能够显著降低豹点、红扇孔雀鱼的盐度耐受极限(降低水温能够显著提高豹点孔雀鱼的盐度耐受极限)，在温度为16 ℃和22 ℃时，豹点孔雀鱼盐度耐受极限优于红扇孔雀鱼；在盐度为20的环境下，升高水温能够显著提高豹点、红扇孔雀鱼的盐度耐受极限，在温度为28 ℃时，红扇盐度耐受极限高于豹点孔雀鱼。

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